0.1M 亚精胺溶液 (过滤除菌 )

亚精胺溶液通用说明书

产品简介：

0.1M 亚精胺溶液（过滤除菌）为新鲜配置的，经二次无菌过滤的溶液。一般与氯化钙一起用于基因枪转化法转基因实验。亦可用于其他实验的高浓度储备液。

B01630为非无菌款。

B01620为特殊除杂除菌款，但不能直接使用（超高浓度对实验有干扰影响），建议稀释至0.1M或其他适宜浓度，去离子水溶解，并经滤膜二次过滤后再直接使用。

操作步骤（仅供参考 0.1M）：

1. 在进行实验前，至少培养样品30 天，这样确能保叶片大于5×6 cm²。
2. 根据以下步骤制备DNA-金粉混合液：
   1. 将金粉微粒中加入充足的无菌蒸馏水。
   2. 使用100％乙醇对金粉微粒进行三次洗涤并弃去浮层。
   3. 加蒸馏水使金粉微粒重新悬浮。
   4. 将准备好的DNA 溶液（1μg/μl）添加到金粉微粒溶液中，形成浓度为1μg DNA / 0.6mg金粉微粒悬浊液。
   5. 剧烈摇晃微离心管使得样品混合均匀。
   6. 滴入适当体积的0.1M 亚精胺和2.5M CaCl₂ 进入试管，同时不断剧烈地摇晃。
   7. 继续摇晃一分钟以上。
   8. 用100％乙醇进行三次洗涤，并弃去浮层。
   9. 重新使DNA 包裹的金粒子悬浮于100%的乙醇中。
3. 按照说明书中要求的，讲UTS-10 安装到GDS-80 系统上，并设置40-50 psi 的传递压力。
4. 调整距离量尺至6-8cm 的传递距离。
5. 把四爪叶片夹夹到目标叶上，用手调螺栓将其拧紧固定。
6. 将等分10μl DNA 混匀悬浊液倒入样品装载孔中。
7. 对叶片标本进行轰击。
8. 培育植株三天以上，通过使用CRi MaestroTM 的体内成像系统观察荧光结果。

注意事项：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。