Galbraith解离液

植物组织解离液说明书

货号: B11020

规格: 100ml/500ml

英文名称：Galbraith Isolation Buffer

别名: 细胞核悬液提取液/植物组织解离液

保存条件: -20℃保存，保质期 2 年。

产品说明:

本产品仅用于科研，不可用于其他。

植物的核 DNA 含量和倍性水平是植物学研究中重要的基础研究指标。流式细胞术的应 用，提高了植物核 DNA 含量检测的准确度和检测速度。只通过物理方法即切碎叶片往往不能获取大量完整的细胞核，还需加入特定的解离液，使植物细胞破碎，分散细胞器，进而解离出细胞核。同时解离液还可以防止细胞间相互粘连，抵消次生代谢物带来的消极影响，并维持一定的渗透压，保证细胞核的完整性。

使用举例

Otto 两步法：

1. 分别取内标植物和黄芩叶片约 1cm² 放到培养皿中，加入 4℃保存备用的 OttoⅠ提取液 1mL，用锋利的单刃刀片垂直快速切碎叶片；
2. 混匀后用枪头吸取提取液经 30um 的滤头过滤到 1.5mL 的离心管中，4℃、1000g 离心 5min，小心吸弃上清；
3. 加入 500uL Otto II 溶液（临用前加入 0.02mg/mL RNase A+0.02mg/mL PI）备用。

LB01 一步法（其他解离液（例Galbraith解离液）参照此解离步骤）：

1. 同两步法取材后，加入分装解冻后的 LB01 提取液 1mL，快速切碎和过滤得细胞核悬 液；
2. 在上机测试前约 5min，每管加入 20uL 的 RNase 储存液（1mg/mL）和 20uL 的 PI 储存液（1mg/mL）。

注意：上述操作中，刀片要锋利，材料要浸入提取液，垂直快速切碎，解冻的 PI 和加入 PI 的细胞核悬液，均需要冰上低温避光保存，每个样品需要 3 个重复。

荧光染料选择： Hoechst 33342，Hoechst 33258 和 DAPI 属于非嵌入式染料，主要结合在 DNA 的 A-T 碱 基区，因此此类染料不适合于检测基因组绝对值，实际测量值偏小。但是可以获得高分辨率的柱状图，可以用于倍性水平检测。 PI，EB，AO 为嵌入式染料，在检测核 DNA 的含量前，需要先降解 RNA，排除双链 RNA 的干扰，此类染料只能染死细胞，也可以用来区分活死细胞。