MTT溶液 (0.5% ) (5mg/mL )

MTT 溶液(5mg/mL)

货号：C01600

规格：1ml/5ml /10mL

保存：-20℃避光保存，一年有效。

产品说明：

MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT检测原理在于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色Formazan并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在特定溶剂 (如DMSO)存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

操作步骤（仅供参考）：

1. 细胞用含血清的培养液培养至对数生长期，常规胰蛋白酶消化液消化细胞（悬浮细胞无需消化）。
2. 低速离心，收集细胞沉淀。
3. 用培养液重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬液，并计数。
4. 细胞接种于96孔培养板，一般接种密度为3000-10000/孔。通常细胞增殖实验每孔加3000个细胞，细胞毒性实验每孔加6000个细胞即可。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。
5. 37℃ 5% CO₂继续培养或按照实验具体需要进行培养，一般培养6-24h。
6. 按照实验具体要求，给予0-20μL干预药物处理，37℃ 5% CO₂继续培养至合适时间。
7. 弃培养液，每孔加入MTT溶液和新鲜培养液，在细胞培养箱内继续孵育。
8. 弃培养液，每孔加入DMSO，置摇床上低速震荡，使结晶物充分溶解。如果紫色结晶较小或较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多，溶解的时间会长一些。
9. 在酶标仪570nm测定各孔吸光度。若读数超出最大范围，可改用OD490测定各孔吸光值。

注意事项：

1、MTT溶液尽量减少反复冻融的次数，以免失效，当颜色变为灰绿色时，请勿使用。

2、由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，应注意蒸发问题。

3、MTT溶液在低温情况下会凝固，使用前请置于室温或20-25℃水浴至全部融解后使用。

4、观察Formazan是否完全溶解，亦可借助光学显微镜观察。

5、培养细胞时尽量避免细菌污染。

6、应注意设立OD调零孔和对照。

7、含酚红的培养基和盐溶液会使背景的吸光值增高，同时也会降低灵敏度。

8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。