吖啶橙 (AO )-EB双染色试剂盒

吖啶橙(AO)-EB双染色试剂盒说明书

货号: C01670

规格：100T

保存：2-8℃，避光，6个月

产品说明（仅供参考）:

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA 片段化检测方法以及TUNEL 等标记片段化 DNA 方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的;细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞死细胞,测定细胞代谢活性和形态学观察,这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的因而不一定反映实际情况，MTT 法是测定线粒体中特有酶的活性，反映细胞数目的变化其结果与细胞死亡的数目未必完全一致。

Acridine Orange 属于三环杂芳香燃料，可以标记 DNA、RNA，属于异染性荧光染料AO 常用于细胞内 DNA和 RNA 进行检测，AO 与核酸结合方式主要有: 1、插入性结合AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为 AO 与 DNA 的结合，其荧光发射峰为 530nm，激发后呈绿色荧光;2、静电吸引，带正电荷的 AO 与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为 AO 与RNA 的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此AO 嵌合到双链DNA分子中显绿色，与 DNA 单链或 RNA 结合时发橙红色荧光; Ethidium Bromide 嵌合到双链 DNA 或 RNA 的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光;AO 可透过活细胞膜，EB不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料

1、荧光显微镜、低速离心机、细胞计数板、载玻片、盖玻片

2、PBS

操作步骤(仅供参考):

1、收集细胞，用 PBS清洗细胞1次，加入适量的 PBS 重悬细胞，计数并调节细胞浓度至(0.2~5)×10⁶/ml

2、配制 AO/EB 工作液: 取适量的试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)，按照试剂(A): 试剂(B): 试剂(C)=1: 1: 8 的比例稀配制成 AO/EB 工作液

3、每25~50µL细胞悬液中加入 AO/EB 工作液 2ul，混合均匀，室温孵育 5~15min。

4、取洁净载玻片，滴加上 5~10ul 细胞悬液，轻轻盖上盖玻片

5、在荧光显微镜 B 域进行观察

染色结果:

活细胞 绿色荧光

死细胞 橙色荧光

注意事项:

1、用能通过活细胞膜与 DNA 结合后发蓝色荧光的 Hechst33342 和只能通过死细胞与DNA结合后发红色荧光的 Propidium lodide 对细胞进行双染的方法也比较常用。

2、 如有低温离心机进行离心效果更佳。

3、操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。

4、EB Solution 有一定毒性，请小心操作。

5、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。