AO/PI双染色试剂盒

AO/PI双染试剂盒说明书

货号：C01700

规格：100-200T

保存：2-8℃，避光保存，有效期6个月。长期请-20℃避光保存。

试剂盒组成：

产品简介：

AO/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是采用DNA探针双染细胞核的方法检测细胞的状态。吖啶橙(Acridine Orange，AO)为一种荧光染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。AO激发波长为488nm，吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，复合物可发出不同颜色的荧光，红色荧光为AO-DNA(F>600nm)，绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。

碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种DNA结合性染料，PI激发和发射波长分别为535nm和615nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。

操作步骤(仅供参考)：

本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片等。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，其他方法请参阅相关资料。

1. 染色缓冲液的配制：根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。取100μL试剂C加900 μL无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。
2. 收集样本细胞，细胞数量在10×10⁵个以内。
3. 用PBS洗涤细胞两次。
4. 用500μL染色缓冲液将细胞重悬。
5. 加入5μL AO染色液。
6. 加入5μL PI染色液。
7. 轻轻混匀后4℃避光孵育10-20mim。
8. 用PBS洗涤细胞。
9. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。

结果分析（细胞样本）：

AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色，形态结构正常。当细胞凋亡时，染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染。坏死细胞呈强红色荧光。

注意事项：

1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 如置于-20℃保存，应尽量避免反复冻融，以防试剂失效。
3. 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
4. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
5. 不建议与其他品牌的试剂混用，可能会影响使用效果。
6. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
7. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
8. 产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。