包虫病核酸检测试剂盒

包虫病 ( hydatid disease ) 核酸检测试剂盒 (荧光 PCR 法)说明书

货号: C01720

规格: 50T

英文名称: Diagnostic Kit for hydatid disease DNA( Real- Time PCR Method)

预期用途

本试剂盒适用于检测粪便等标本中包虫病 DNA ，适用于包虫病感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。

检测原理

本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对包虫病特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对包虫病的DNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

试剂组成

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

储存条件及有效期

-20℃±5℃ ，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

适用仪器

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P 、LightCycler、Bio-Rad 、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

标本采集

取待检动物粪便取 1g 左右。

保存和运输

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

使用方法

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g ，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；咽拭子样品直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2 核酸提取

推荐采用核酸提取或纯化试剂 (磁珠法或离心柱法) 进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 10 份，多配制 1 份) ，每测试反应体系配制如下表：

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，20uL/管。

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL ，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。

4. PCR 扩增（核酸扩增区）

4. 1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；

荧光通道选择：

检测通道 (Reporter Dye) FAM ， 淬灭通道 (Quencher Dye) NONE ，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

4.3 推荐循环参数设置：

5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~ 15 范围内调节) 、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节) ，以及 Threshold 的Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照) ，重新分析结果。

5.2 结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤40 ，且曲线有明显的指数增长曲线；

阴性：样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。

6. 质控标准

阴性质控品：阴性对照无特异性扩增曲线或无 Ct 值；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且 Ct 值≤32；

以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

7. 检测方法的局限性

1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

2.样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

3.阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

4.病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

5.不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

6.试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

7.本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

注意事项

1.所有操作严格按照说明书进行；

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

3.反应液应避光保存；

4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行， 以免交叉污染；

7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。