磺酰罗丹明 B 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒/SRB细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

磺酰罗丹明 B / SRB细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

注意:正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

货号：C01980

规格：500T/1000T

保存：2-8℃避光，有效期12个月。

产品内容：

产品说明：

SRB细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒是一种替代MTT 法的细胞活性检测方法。SRB 可与生物大分子中的碱性氨基酸结合，在490nm~520nm 波长处其OD 值与活细胞数成良好的直线关系。在515nm 的OD 读数，可用做细胞数的定量。

SRB 法比MTT法稳定性更高。SRB法可以用于悬浮细胞的检测。

产品特点：

1. 稳定性高。
2. 没有严格时间限制，固定后或SRB结合后的细胞均可存放，样品7天后测定的OD值下降不超过2％。
3. SRB法对于测定悬浮细胞无细胞损失，结果灵敏准确，重复性好。

样本类型：

• 悬浮细胞
• 贴壁细胞

需自备试剂耗材及仪器：

仪器：酶标仪、离心机、移液器、冰箱、冰盒

试剂：PBS缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1×))(phosphate buffer saline/Dulbecco's PBS:约含8mM Na₂HPO₄、2mMKH₂PO₄、137mM NaCl和3mM KCl)

或者HBSS (Hank's Balanced Salt Solution: With: Calcium Magnesium Glucose; Without: Phenol Red. Components: CaCl₂(anhydrous) 140mg/L(1.261mM)、MgCl₂-6H₂O 100mg/L(0.493mM)、MgSO₄-7H₂O 100mg/L(0.407mM)、KCl 400mg/ L(5.333mM)、KH₂PO₄ 60mg/L(0.441mM)、NaHCO₃ 350mg/L(4.167mM)、NaCl 8000mg/L(137.931mM)、Na₂HPO₄(anhydrous) 48mg/L(0.338mM)、D-Glucose 1000mg/L(5.556mM)

耗材：离心管、吸头、一次性手套

操作步骤（仅供参考）：

使用注意事项：

• 接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而不作为指标检测孔。
• 培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。
• 洗细胞时充满孔后保持一会倒掉即可，也可以用排枪或洗板机。
• OD 值在1-2 之间较好。

以下以 96 孔板100ul培养基培养细胞为例，如果用于其他方法培养的细胞，等比例调整试剂用量即可：

1. 试剂配制：

1×洗涤液 D：根据样品数量，用纯水 100倍稀释100×洗涤液D。

1×溶解液：根据样品数量，用纯水10倍稀释10×溶解液。

1. 细胞检测：
2. 取出培养好待测的96 孔板。
3. 在培养基表面小心加入50ul 固定液（悬浮细胞加100ul 固定液），静置5 分钟后放入4℃冰箱30 分钟-1 小时。（注：贴壁细胞可弃培养基后加入用纯水3 倍稀释的固定液；悬浮细胞必须直接在培养基上加入固定液，否则容易导致细胞损失。轻加在培养液面，静置5 分钟后再将平板移至4℃放置1 小时，可使悬浮细胞固定在培养孔底部）。
4. 弃固定液。
5. 每孔100ul 洗涤液B洗一次，然后用纯水洗3-5 次，室温干燥。
6. 加入100ul 染色液，室温避光振荡染色15-20 分钟。
7. 弃染色液。
8. 用 1×洗涤液D 洗3-5 次，至未结合的剩余染色液洗净为止。室温干燥。
9. 加入100ul 溶解液，室温避光振荡染色5 分钟。
10. 酶标仪测定515nm 或540nm 吸光度。

注意事项：

1. 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
2. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
3. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
4. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
5. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。