碘化丙啶PI染色液(50μg/ml)
货号: C02020
规格:10mL/100mL
保存: -20℃，24个月。
产品简介:
碘化丙啶染色(PI stain)可以对细胞周期与细胞凋亡进行分析。碘化丙啶(Propidiumlodide，PI是一种可以嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。碘化丙啶与双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被Propidium lodide染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含星测定。
碘化丙啶染色液(50μg/ml)主要由PI､破膜剂等组成，经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测，亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。PI染色液工作浓度为20~ 50μg/ml，不含RNase，推荐用于RNA染色，细胞检测含量范围一般为0.1~1×106之间｡
操作步骤(仅供参考):
1､细胞样品的制备：
(1)贴壁细胞：
①小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用｡
②用胰蛋白酶消化细胞至可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞｡
③收集上述细胞悬液到离心管内｡
④4℃，离心，使细胞沉到管底｡小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl培养液，以免吸走细胞｡
⑤加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管｡
⑥4℃，1000g 离心 3～5min，使细胞沉到管底｡
⑦小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS ，以免吸走细胞｡
⑧轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团｡
(2)悬浮细胞：
①4℃，1000g 离心 3～5min，使细胞沉到管底｡
②小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl培养液，以免吸走细胞｡
③加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管｡
④4℃，1000g 离心 3～5min，使细胞沉到管底｡
⑤小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞｡
⑥轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团｡
2､细胞的固定：
加入1ml冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h或更长时间｡ 4℃固定12~ 24h可能效果更佳｡
3､细胞的清洗：
①4℃，1000g 离心 3～5min，使细胞沉到管底｡
②小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl溶液，以免吸走细胞｡
③加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管｡
④4℃，1000g 离心 3～5min，使细胞沉到管底｡
⑤小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞｡
⑥轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团｡
4､PI 染色：
在每个待检细胞样品中加入500μl配制好的PI染色工作液，轻轻重悬细胞沉淀，置于37℃避光水浴30min｡在24h内进行染色或流式细胞仪分析｡
5､检测与分析：
用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况｡采用适当分析软件进行细胞DNA或RNA含量分析和光散射分析｡
染色结果:
凋亡细胞G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型，在光散射谱上，前向光散射低于正常，侧向光散射高于正常｡
注意事项:
- 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测｡
- 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液｡
- 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当 提高离心力或延长离心时间｡
- 如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化后，制备成单细胞悬液，才可以进行检测｡
- 细胞凋亡时，凋亡细胞的标志之一是 DNA可染性降低，但这种情况并是绝对的，DNA含量的降低或者DNA与染料结合能力下降也会导致DNA可染性降低，在分析的时候应特别注意｡
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作｡