脂质体3000/Lipo3000

脂质体3000说明书

货号: C02470

规格：0.5mL/1mL

英文名称：Lipo 3000

保存：2-8℃保存，有效期2年，避免冷冻，使用前请轻轻混匀。

产品说明（仅供参考）:

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

Lipo 3000试剂采用了脂质纳米颗粒(Lipid Nanoparticle)LNP递送技术,利用脂质形成纳米微粒将核酸包裹起来形成核酸脂质纳米粒，实现高转染性和可重复性的实验结果。其可针对广泛类型的常见及难转染细胞，实现超高转染效率，同时提供更高的细胞活力。Lipo 3000对大多数细胞毒性低并且性质温和，并且我们优化了转染过程的全部四个步骤，并结合脂质体纳米颗粒(LNP)递送技术，实现了较高的转染性能并可以降低所需的试剂量，同时尽可能降低对细胞系产生毒性的风险。对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。

适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。

产品特点:

1. 卓越的转染效率—针对较难转染细胞，可将效率提升2～10倍。
2. 作用温和，细胞毒性低—可改善细胞活力。
3. 高性价比高，同时实现更好的转染结果。

使用说明（每次转染一定要进行预实验，来摸索最佳条件，尤其是转染试剂的最佳用量）

1. DNA转染：

对大多数细胞来说，转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。

1. 接种细胞至70-90%汇合度时转染。
2. 按照下表使用Opti-MEM培养基稀释Lipo3000®-B试剂(建议同时用2管)，充分混匀。
3. 使用Opti-MEM培养基稀释DNA，制备DNA预混液，然后添加Lipo3000-A试剂，充分混匀。
4. 在每管已稀释的Lipo3000-B试剂中加入稀释的DNA(1:1比例)。
5. 室温孵育5分钟。
6. 加入DNA-脂质体复合物至细胞中。
7. 37℃孵育细胞2-4天。然后分析转染细胞。
8. siRNA转染：

转染siRNA至细胞中时，遵循如上所述的DNA实验方案，但在稀释siRNA时不要加入Lipo3000-A试剂(第3步)。

细胞转染注意事项：

1. 转染试验失败需要找一下原因：DNA/siRNA，转染试剂和细胞。转染效率低要先排除一下是否是siRNA的问题，如果siRNA无效，换再好的转染试剂也没意义，可以用带荧光标记的control siRNA做一下看看，转进去的话会有荧光的。确实转染效率低，可以考虑换转染试剂；毒性大则要减少转染试剂的用量。
2. 细胞的种类和状态影响较大：转染时细胞必须处于良好生长状态，转染时细胞的密度一般铺板率在达到70—80%最好（此时细胞处于对数生长期）；
3. 如果是贴壁细胞，应保证贴壁在12～24小时再进行转染，否则细胞转染容易脱壁。对于贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×10⁶-4×10⁶细胞/mL（悬浮细胞）为宜，最好在转染前4h换一次新鲜培养液。
4. 质粒的大小，质量和用量对转染效率很关键。
5. 转染时注意脂质体和用量，过量的话对细胞毒性大也容易失败。
6. 转染作用6小时一定记得要换含血清的培养基。
7. 培养基以及洗涤细胞和稀释用的培养基要无血清、无双抗。
8. 转染试剂对个别细胞可能有一定毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。
9. 高纯度的DNA或RNA可获得较高的转染效率！用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。另外，使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故用无血清培养基转染效果更好！
10. 培养基中的血清：在开始准备DNA和转染试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。其实，只要在DNA-转染试剂复合物形成时不含血清，在转染过程中是可以使用血清的。
11. 培养基中的抗生素：抗生素是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率降低。
12. 一般在转染24-48h，靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的，24-48h后即可进行靶基因表达的检测实验。
13. 如若建立稳定的细胞系，则可对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素和新霉素等。
14. 建议设置阳性对照和阴性对照。

注意事项：

1. 产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
2. 期货、-80℃保存、抗体、重组蛋白、效期较短(六个月以内)等特殊产品，一经订购，若无质量问题，恕不予退换！

附表：贴壁细胞培养体系推荐初始转染条件