产品详情
Fluo-3，AM 试剂盒说明书
货号：C02710
规格：200T（以96孔为例）
保存：-20℃干燥避光，至少一年。
产品内容：
名称 | 规格 | Storage |
5mM Fluo-3，AM | 20μL | -20℃干燥避光 |
20% Pluronic F127 | 20μL | RT干燥避光 |
HBSS | 75 ml×2 | 4℃ |
HEPES buffer saline | 100ml | 4℃ |
产品说明：
Fluo-3, AM（MW: 1129.85）是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3 ，从而被滞留在细胞内，Fluo-3 若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506nm ，最大发射波长为526nm 。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm 左右，发射波长为525～530nm 。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
操作说明：
- 向Fluo-3，AM/DMSO 溶液中加入等体积的20%的Pluronic F127 溶液，Pluronic F127 可以防止Fluo-3，AM 在HBSS 中聚合并能够帮助其进入细胞。
注意：不建议在Pluronic F127 中长期保存Fluo-3，AM 溶液。Pluronic F127 的量可以适当调整。Pluronic F127 和Fluo-3，AM 一定要确保完全溶解后才可使用。
- 用HBSS 稀释Fluo-3，AM 溶液，制备4μM 的Fluo-3，AM 工作液。
- 将Fluo-3, AM 工作液加入细胞，在37℃培养20 分钟。
- 加入5 倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40 分钟。
- 用HEPES buffer saline 洗涤细胞3 次，然后用HEPES buffer saline 使细胞重悬浮，制成1×105cells/mL 的溶液。
- 37℃下培养10 分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长506nm，发射波长526nm。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。