单细胞全基因组扩增试剂盒（MDA）说明书
货号：C02770
规格：24rxns/96rxns
保存：请于干冰中寄送，在收到试剂盒后立即将所有组分储存于-20℃恒温冰箱中，可保存6个月。如需更长期储存请-70℃以下存放。
产品内容：
Component | RE1321 24 rxns | RE132196 rxns |
SC-DNA Polymerase | 48 μl | 192 μl |
SC-Reaction Buffer | 1 ml | 4×1 ml |
Buffer D | 1 ml | 1.5 ml |
Buffer N | 1 ml | 1.5 ml |
DTT, 1 M | 1 ml | 1 ml |
PBS | 1 ml | 1.5 ml |
产品简介
单细胞全基因组扩增试剂盒基于MDA的等温扩增体系，可以以单个细胞或者微量样本为模板实现全基因组扩增。单细胞全基因组经扩增后扩增产物大小在2-100 kb间， 可广泛适用于二代测序、大片段拷贝数变异分析、微卫星分析、qPCR分析、基因芯片 分析等。
本试剂盒使用的Phi29 DNA聚合酶是从噬菌体中克隆的DNA聚合酶，具有很强的链 置换活性和链亲合力，单次聚合反应可以实现长达100 kb的连续聚合延伸，其扩增产物 适用于多种下游应用， Phi29 DNA聚合酶还具有很强的3’-5’外切酶活性，保证了DNA合 成的高保真性。正常情况下一个反应可以产生大于20μg高覆盖度的基因组DNA。
自备仪器、试剂
离心机、水浴锅或PCR仪、反应管：建议使用低吸附的PCR管、枪头：建议使用高质量过滤枪头防止污染
去离子水
注意事项
1 ．本产品检测灵敏度极高，实验操作应在正压的超净工作台中完成，扩增反应产物浓度 较高，应做好隔离，避免扩增产物导致的气溶胶污染。
2 ．以低质量的样品为模板会影响最终的扩增产物质量，应尽量避免使用大量降解和片段 化的DNA作为起始样本。
操作步骤
细胞为模板扩增
本方案适用于以1-1000个细胞为模板进行全基因组无差别扩增。应使用新鲜制备的细胞样品，以保证起始基因组的完整性，请勿使用已发生凋亡的细胞。
1．准备Buffer D2(下表给出的Buffer D2体积足够12个反应， 一次实验未完全用完可储存于-20°C ，但储存时间不能超过3个月)。
组分 | 体积 |
Buffer D DTT, 1 M 总体积 | 33 μl 3 μl 36 μl |
2．将4 μl细胞样品(重悬于PBS中)加入到PCR管中。 如果样品体积少于4 μl，请使用PBS 补足到4 μl。
3．加入3μl Buffer D2，轻弹管壁混匀并短暂离心收集。请确保细胞没有粘附在管壁上，请勿使用移液器吹打，避免细胞样品粘附到移液器的吸头上。
4．样品65℃孵育10 min。
5．加入3 μl Buffer N，轻弹管壁混匀并短暂离心。在下步反应准备好之前请将样品置于 冰上。
6．按照下表准备反应混合液，混匀并短暂离心。
组分 | 体积 |
SC-Reaction Buffer SC-DNA Polymerase 总体积 | 38 μl 2 μl 40 μl |
7．立即将40µL反应混合液加入到准备好的10µLDNA样品中(第5步)，轻弹管壁混匀并短暂离心收集。
8．30℃孵育2h，如有需要可延长孵育时间增加产量。
9．65℃孵育5 min失活SC-DNA Polymerase。
注：扩增产物是高浓度基因组DNA，请使用水或者TE稀释到合适的浓度后进行下游实 验。扩增产物可广泛应用于全基因组和外显子测序、 qPCR分析、基因芯片分析等。
基因组为模板扩增
本方案适用于大于1 ng纯化的基因组DNA为模板进行全基因组的无差别扩增，如果基因组完整度与纯度足够高，更少的起始DNA也可以使用。
1．准备Buffer D1及N1(下表给出的体积足够12个反应，一次实验未完全用完可储存于 -20°C ，但储存时间不能超过3个月)。
组分 | Buffer D1 | Buffer N1 |
Buffer D | 7 μl | — |
Buffer N | — | 9 μl |
水 | 25 μl | 51 μl |
总体积 | 32 μl | 60 μl |
2．将2.5 μl DNA样品加入到PCR管中，如果样品体积少于2.5 μl，请使用水或者TE补足 到2.5 μl。
3．加入2.5 μl Buffer D1，轻弹管壁混匀并短暂离心。
4．室温（15-25℃)孵育3 min。
5．加入5 μl Buffer N1，轻弹管壁混匀并短暂离心。下步反应准备好之前请将样品置于 冰上。
6．按照下表准备反应混合液，混匀并短暂离心。
组分 | 体积 |
SC-Reaction Buffer SC-DNA Polymerase 总体积 | 38 μl 2 μl 40 μl |
7．立即将40 μl反应混合液加入到准备好的10 μl DNA样品中(第5步)，轻弹管壁混匀并短 暂离心收集。
8．30℃孵育2h，如有需要可延长孵育时间增加产量。
9．65℃孵育5 min失活SC-DNA Polymerase。
注：扩增产物是高浓度基因组DNA，请使用水或者TE稀释到合适的浓度后进行下游实验。扩增产物可广泛应用于全基因组和外显子测序、 qPCR分析、基因芯片分析等。