单细胞全基因组扩增试剂盒说明书
货号：C02920
规格：24rxns/96rxns
英文名称：Single Cell WGA Kit
保存：请于干冰中寄送，在收到试剂盒后立即将所有组分储存于-20℃，恒温冰箱中，可保存12个月。如需更长期储存请-70℃以下存放
产品内容：
Component | C02920 24 rxns | C02920 96 rxns |
Cell Lysis Buffer | 240 μl | 960 μl |
Cell Lysis Enzyme | 16 μl | 64 μl |
Pre-Amp Buffer | 120 μl | 480 μl |
Pre-Amp Enzyme Mix | 7 μl | 28 μl |
Amplification Buffer | 1.5 ml | 4× 1.5 ml |
Amp Enzyme Mix | 50 μl | 200 μl |
产品简介
单细胞全基因组扩增试剂盒可以以单个细胞或者微量样本为模板实现全基因组扩增。单细胞扩增反应时间短，总过程约3 h，反应经裂解、预扩增、扩增过程即可得到2-5μg的基因组DNA，大小在200-1500 bp左右。扩增产物可广泛适用于二代测序、大片段拷贝数变异分析、SNP分型、qPCR分析、基因芯片分析等。
自备仪器、耗材
PCR仪、反应管：建议使用低吸附的管子、枪头：建议使用高质量过滤枪头、微型离心机、漩涡混和仪
注意事项
本产品检测灵敏度极高，实验操作应在正压的超净工作台或洁净环境中完成，扩增反应产物浓度较高，应做好隔离，避免扩增产物导致的气溶胶污染。
操作流程示意图
操作步骤
实验前准备
通过流式细胞仪分选，缓冲液稀释，显微操作和激光显微切割等方式获得单细胞， 建议在实验前对细胞进行清洗，清洗液为不含Mg2+和Ca2+ 的1×PBS溶液，需注意，确保后续实验中的PBS溶液的体积不超过2 µl。
注意
由于实验全程在同一PCR管中进行且反应体积较小，因此加液操作时移液器吸头不要接触管中液体，避免将单细胞或DNA带出反应体系；移液时，请沿管壁小心添加，勿 吹打PCR管中液体；反应前，请进行短暂离心，确保反应体系中的液体混和均匀。
使用前请将细胞裂解酶、预扩增酶和扩增酶置于冰上解冻。
1 ．细胞裂解
- 根据反应的数量N，混和Cell Lysis Buffer和Cell Lysis Enzyme，震荡混匀，短 暂离心备用。
细胞裂解混合液 | 体积 |
Cell Lysis Buffer Cell Lysis Enzyme Total Volume | 9.4 μl × N 0.6 μl × N 10 μl × N |
2）将单细胞与细胞裂解混合液混匀于PCR管中，运行以下程序。
循环数 | 温度 | 时间 |
1 | 50℃ 95℃ 4℃ | 20 min 10 min Hold |
2 ．预扩增反应
- 根据反应的数量N，混和Pre-Amp Buffer和Pre-Amp Enzyme Mix，震荡混匀，短暂离心备用。
预扩增混合液 | 体积 |
Pre-Amp Buffer Pre-Amp Enzyme Mix Total Volume | 4.75 μl × N 0.25 μl × N 5 μl × N |
2）加入5 μl预扩增混合液于上步10 μl裂解反应产物中，运行以下程序。
循环数 | 温度 | 时间 |
1 | 95℃ | 2 min |
12 | 95℃ 15℃ 25℃ 35℃ 65℃ 75℃ | 15 s 50 s 40 s 30 s 40 s 40 s |
1 | 4℃ | Hold |
3 ．扩增反应
1）根据反应的数量N，混和Amplification Buffer和Amp Enzyme Mix，震荡混匀，短 暂离心备用。
扩增混合液 | 体积 |
Amplification Buffer Amp Enzyme Mix Total Volume | 58 μl × N 2 μl × N 60 μl × N |
2）加入60 μl扩增混合液于上步15 μl预扩增反应产物中，运行以下程序。
循环数 | 温度 | 时间 |
1 | 95℃ | 2 min |
14 | 95℃ 65℃ 75℃ | 15 s 1 min 1 min |
1 | 4℃ | Hold |
说明：循环数可根据需要调整，对于流式分选等方式获得的单细胞建议14个循环。
扩增产物检测
1 ．琼脂糖凝胶电泳
取5 μl扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳（1%琼脂糖凝胶， 110 V，25-35分钟）， 扩增产物大小为200-1500 bp。
2 ．定量
对扩增产物进行磁珠或柱式纯化，纯化产物使用Qubit进行定量，终产量为2-5 μg。