酵母核糖体提取试剂盒

酵母核糖体提取试剂盒

货号：C03000

规格：50T/100T

有效期：2-8℃保存，有效期一年。

产品内容：

注：

1. 酵母核糖体提取液B长期不用时-20℃保存。避免反复冻融。
2. 酵母洗涤液D长期不用时-20℃保存。
3. 试剂拆封后请尽快使用完！

产品简介：

核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle)，主要由RNA和蛋白质构成,其唯一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链，所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构，主要由蛋白质（40%）和 RNA（60%）构成.核糖体按沉降系数分为两类，一类（70S）存在于细菌等原核生物中，另一类（80S）存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内，有的结集在一起。

酵母核糖体提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取总核糖体。提取过程简单方便。

本试剂盒不能用于冷冻样品的核糖体提取。

本试剂盒需要使用超速离心。如果没有超速离心的条件，可以选择采用低速离心提取核糖体的试剂盒。使用超速离心的试剂盒的核糖体纯度高于低速离心的试剂盒，低速离心的试剂盒产品提取时间较长，需要过夜处理。请根据试剂需要选择。

自备试剂和仪器：

离心机、振荡器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒、PBS缓冲液、离心管、吸头、一次性手套

一、使用注意事项：

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4. 如果是做核酸类下游应用，实验中所有液体以及器具均应该用DEPC处理。用0.1%的DEPC处理12小时然后高压。
5. 下游用于蛋白质类实验的话可以不用DEPC处理。
6. 细胞最好采用新鲜收集的，或者收集后立即置于-80℃保存的样本。
7. 最好使用标准Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是核糖体回收率可能会下降。

二、酵母核糖体提取：

1. 酵母培养物，在4℃，1000g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
2. 用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每100ul体积或100mg湿重酵母沉淀物中加入400ul酵母核糖体提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
4. 在1000g条件下离心5-10分钟，收集酵母沉淀。
5. 用300ul酵母洗涤液D重悬细胞，静置10分钟，离心收集酵母。
6. 酵母沉淀物中加入500ul酵母核糖体提取液B，充分混匀。
7. 在37℃或室温条件下轻微振荡60-90分钟。
8. 在2000g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
9. 沉淀用300ul酵母洗涤液D洗涤两次。离心收集沉淀。
10. 在沉淀中加入400μl酵母核糖体提取液C，充分混匀，用Dounce匀浆器匀浆20-30下。
11. 将匀浆液在4℃，1000×g条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
12. 将上清在4℃，20000×g条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
13. 将上清在4℃，100000×g-120000×g条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
14. 弃上清，沉淀即为核糖体。
15. 沉淀用核糖体保存液或其他相应的缓冲液重悬。即得到酵母核糖体样品。
16. 置冰箱备用或直接用于下游实验。

注意事项：

1. 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
2. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
3. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
4. 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
5. 如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。