活细菌/死细菌染色试剂盒
货号：C03330
保存：-20℃避光保存，有效期 6 个月。 产品内容：
试剂盒组份 | 20T | 100T |
试剂A：NucGreen | 20μL | 100μL |
试剂B：EthD-Ⅲ | 40μL | 200μL |
产品简介：
试剂盒包含两种荧光染料，NucGreen是绿色核酸染料，可染色活细菌和死细菌； EthD-Ⅲ是红色 核酸染料，仅染色细胞膜受损的死细菌 。将NucGreen和EthD-Ⅲ共同使用，具有鉴别细菌死活的能力 。完整细胞膜的细菌呈现绿色，而具有受损细胞膜的细菌在不同通道下可分别呈现绿色和红色。
细菌活力的常见标准是在合适的营养培养基中繁殖的能力，称为生长测定。本试剂盒通常与在液 体或固体培养基中的生长测定结果有着很好的一致性 。但在某些条件下，膜损伤的细菌可能会在营养 培养基中恢复并繁殖，而这种细菌在本测定中会被认定死菌。相反，一些具有完整膜的细菌可能无法 在营养培养基中繁殖，但在本测定中会被认定活菌 。 因此，若本试剂盒检测结果和细菌生长测定之间 有较大的差异，应考虑上述可能。
光谱特性：
NucGreen：Ex/Em:503/530nm(结合DNA) EthD-Ⅲ：Ex/Em:530/620nm(结合DNA)
产品使用(仅供参考)：(以 Esc.coli 为例荧光镜检)
( 1) 在合适的液体培养基中培养细菌至对数生长晚期。
(2) 向EP管中加入1mL的菌液，5,000g离心15min。
(3) 去除上清液，加入1mL的0.85%NaCl溶液重悬细菌。
(4) 5,000g离心15min ，去除上清，加入1mL的0.85% NaCl溶液重悬细菌。重复一次。
(5) 将菌悬液密度调整到108个细菌/mL(OD670≈ 0.03)。
(6) 配制染色工作液：取1μL的NucGreen和2μL的EthD-Ⅲ , 充分混匀后，加入8μL的0.85%NaCl溶液。
(7) 取1mL菌悬液，加10μL的染色工作液。充分混合，室温避光孵育15min。
(8) 染色结束后，取10μL菌悬液滴加在洁净的载玻片上，盖玻片压片后尽快观察拍照，避免干片后荧光 猝灭。
(9) 荧光显微镜成像： 绿色荧光可使用FITC适用滤光片观察，红色荧光可使用PI适用滤光片观察。 注意事项
( 1) 若使用孔板检测，可静置10 min后留少量菌液成像，能有效降低背景。
(2) 为更接近真实结果，Merge图片时建议保持红色荧光与绿色荧光亮度一致。
(3) 在对细菌染色之前，必须注意除去生长介质的残留。核酸和其他培养基组分可能会以某种方式结合 染料，导致不可接受的染色变化。不建议使用磷酸盐（PBS） 缓冲液， 以免降低染色效率。
(4) 正式实验前应依据不同菌株适当调整染料用量及浓度。一般最好使用能够提供充足信号的最低染料 浓度。
(5) 本产品仅用于科研。