精子细胞 BWW培养基说明书
货号: C03630
规格: 100mL/500mL
保存条件: -20℃保存，有效期6个月
产品说明:
本产品仅用于科研，不可用于其他。
正常精液是一种混合物，在射精时由睾丸和附睾的分泌物及悬浮其中的精子与前列腺、精囊腺和尿道球腺的分泌物混合而成，最终射出的混合物是一种粘稠的液体。精子分析的方法有很多，其中可通过培养进行检测。
精子细胞 BWW 培养基又称为获能培养液（capacitating medium），主要由系列盐离子、酚红、葡萄糖、丙酮酸钠、BSA 等以及抗生素组成，每 1000mL BWW 培养基中含 100，000U 青霉素钠盐和 100mg 链霉素，是一种旨在用于广谱动物和人体精子细胞获能处理的常用营养液。
操作步骤:
1、取干净的精液样本室温放置 30-60min，使之充分液化。
2、制备精子细胞(仅供参考，不是必须步骤)：
1) 上泳法：取一个无菌的 15mL 锥底离心管，加入 1mL 液化的精液，在其上方轻轻加入 1.2mL Earle 培养液，45°倾斜试管，以增加精液和培养液的接触面积，37℃孵育1小时，轻轻将试管竖直，吸取最上层1mL培养液。加入8mL增补的 Earle 培养液稀释，300～500g离心5分钟，弃上清液。加入 Earle 培养液 0.5mL 重新悬浮细胞，用于精子密度或功能的评估。
2) 非连续密度梯度法：在试管中制备密度梯度液，下层为 1ml 80%（v/v）、上层为 1ml 40%（v/v） 的密度梯度液。将 1ml 精液放入密度梯度液上方，以 300～400g离心 15～30分钟。必要时，每份精液标本可用一个以上的试管。弃去精子沉淀团上的绝大部分上清液。用 5ml 培养液重悬精子沉淀团，轻轻吹打（有助于洗去密度梯度液），然后以200g离心 4～10分钟。弃去精子沉淀团上的绝大部分上清液。用 5ml 培养液重悬精子沉淀团， 轻轻吹打（有助于洗去密度梯度液），然后以200g离心 4～10分钟。用1ml培养液重悬精子沉淀团。
3、将含有精子细胞的离心管置于 37℃含 5%CO2、95%空气的细胞培养箱中孵育3h。如无上述培养箱，可用含Hepes的缓冲培养液，拧紧管盖，置于 37℃的普通培养箱内孵育。在孵育过程中，大多数活动的精子从精浆中游离到覆盖上面的培养液内。
4、离心精子悬液，使精子细胞密度接近于 10×106/mL，将精子重悬于0.5mL精子细胞 BWW 培养基中，并在 37℃含 5%CO2、95%空气的细胞培养箱内孵育18～24小时。如无上述培养箱，可用含Hepes的缓冲培养液，拧紧管盖，置于37℃的普通培养箱内孵育。在孵育过程中，将试管倾斜与水平面成 45°角。将试管恢复垂直位置 20分钟，使获能后不活动的精子沉降下来。
注意事项:
1、注意无菌操作，尽量避免污染。
2、如无 Earle 培养液和增补的 Earle 培养液，可用精子细胞 BWW 培养基代替。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。