人富含NK 活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化试剂盒
货号：C06460
规格：200KIT
储存条件及有效期
常温保存，有效期2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
试剂盒内容：
名称 | 规格 | |
A | 密度梯度分离液原液 | 100ml |
B | 梯度制备稀释液 | 100ml |
实验前准备
1. 适用仪器
最大离心力可达1200g 的水平转子离心机
2. 抗凝剂的选择
在动物实验采血时，很多实验者选择医用真空采血管获得抗凝血，医用采血管中的抗凝剂只考虑血浆质量，但不利于高纯度细胞分离实验。
- 无菌硅化离心管
检验方法
全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。
1. 收集从外周血中分离的单个核细胞；1×108 个悬于1ml 无血清培养基中。
2. 梯度分离溶液制备，使用使用梯度制备稀释液参考下表将原液稀释至所需浓度：
原液浓度（%） | 83% | 79% | 73% | 70% | 66% |
比重（g/ml） | 1.067 | 1.064 | 1.061 | 1.058 | 1.056 |
3. 梯度分离层的制备：将梯度分离液由高密度至低密度逐层加入至10ml 离心管（试管）内，每层约1.2-1.5ml 加入后应可见明显的梯度界面，同时标记70%层上部界面及73% 底部界面位置。
4. 上样：将单个核细胞单细胞悬液1ml 加至梯度界面上。
5. 离心：400g，离心20-25min。
6. 取样：吸取73%与70%溶液界面及上下两层分离溶液（即步骤3 标记位置之间的溶液），细胞经洗涤后供后续试验。
注：样本量加大时请客户按选取对应耗材且按比例增加试剂用量，但应注意加入试剂及样本
后总体积不超过离心管总体积的2/3。
注意事项
1. 实验全过程需在20℃±2℃下进行，否则影响离心效果。
2. 由于多层分离溶液之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。
3. 试剂瓶盖需盖紧，防止蒸发和污染。