鱼脏器组织白细胞分离液试剂盒
货号：C08220
规格：200 mL/kit
保存：室温避光储存，有效期至少2年。启封后置4℃保存，有效期一周。
试剂盒内容：
各种动物脏器组织白细胞分离液 200mL
全血及组织稀释液 200mL
红细胞裂解液 100mL
淋巴细胞分离方法
- 制备脏器组织的单细胞悬液。
- 在离心管中加入适量分离液（细胞悬液体积小于5mL时，加入5mL分离液；大于等于5mL，加入等体积分离 液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将细胞悬液平铺到分离液液面上 方，注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取细胞悬液，然 后将细胞悬液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显 的分层界面。如果样品较多，加样的时间较长，在离心之前出现红细胞成 团下沉属正常现象。）
3. 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min（细胞悬液的体积越大所需的 离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸索，离心转速最大不超 过1200g）。
4. 离心后将出现明显的分层：最上层是稀释的稀释液层；稀释液与分离液之 间是淋巴细胞层；分离液中为粒细胞层（个体差异或者是分离条件不同， 粒细胞层可能分离不明显）；最下层为红细胞层。
5. 小心的吸取淋巴细胞层及分离液层细胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤细胞。250g，离心10min（如有红细胞混杂则加入 适量红细胞裂解液）
6. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。
7. 重复步骤6。
8. 弃上清，细胞重悬备用。
脏器组织单细胞悬液的制备方法
脏器组织研磨的方法：
- 无菌条件下摘取脏器组织，撕去被膜，用眼科剪将脏器组织剪成小块。
- 将尼龙筛网或者是细胞过滤筛放置于平皿上，加入少量全血及组织稀释液（保证脏器组织及获得的细胞处于 液体环境中）。
- 将脏器组织放置于筛网上，使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨脏器组织（尽量控制研磨力度，保持筛网 悬空，避免在皿底上直接研磨而造成大批细胞死亡）
- 研磨完全后使用全血及组织稀释液冲洗筛网，收集细胞悬液，再经滤网过滤。
注：
注：
A. 可用酶消化法，使用胶原酶对脏器组织组织进行消化，得到单细胞悬液。
B. 如果最终得到的细胞需要培养，那全过程所需试剂与器材均要求无菌。
C. 根据脏器组织的体积控制单细胞悬液的浓度在108~109个/mL。
注意事项：
A. 开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。
B. 分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
C. 稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致细胞凝集，大大降低细胞得率及纯度。
D. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。
E. 样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸索最佳的分离条件。
F. 如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生物污染。
G. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。