货号：C09050
规格：300T(300μL）
英文名称：TRITC Phalloidin
分子式：C60H70N12O13S2
分子量：1231.4
最大激发 / 发射波长（ Ex/Em ）：540~546/565~575nm
多肽序列： TRITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6)
外观：紫色液体
保存条件： -20℃保存，1 年有效。
产品说明：
鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd= 20nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin 结合，通常用来标记组织切片，细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin 进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000 Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I 等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。
鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1μg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin 的ATP 水解活性。
本品为TRITC（四甲基异硫氰酸罗丹明）标记的鬼笔环肽，染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin 抗体更好的染色效果，适合用作F-actin 的定性和定量检测。另外，经本品结合后的F-actin 仍能维持actin 自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。
需要自备材料：
1. （可选）甲醇
2. 1×PBS 缓冲液, pH 7.4,细胞培养级别
3. 固定液4%多聚甲醛（溶于PBS 缓冲液）
4. 丙酮或透化液0.5% Triton X-100（溶于PBS 缓冲液）
5. Fluoromount-GTM 水溶性封片剂（不含DAPI），DAPI
6. （可选）DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片剂（含DAPI）
7. （可选）BSA，标准级别
8. 载玻片和盖玻片
9. 盖玻片周围密封液（如透明指甲油）
10. 组装有TRITC 激发/发射滤片，以及DAPI 激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。
操作步骤：
1. 工作液准备
本品以溶于甲醇的20μM 储存液形式提供，总量为300μl。按照100nM 的工作液浓度来换算，可制备总量为60 ml 的工作液。建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，-20℃避光冻存，一年稳定。开始实验前，使用1×PBS 缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为：80~200nM。现配现用。
2. 染色步骤
1） 细胞爬片生长24h，使其密度达到50%汇合度。
2） 吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2 次。
3） 使用溶于PBS 的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10min。
注意：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。
4） 室温条件下，用PBS 清洗细胞2~3 次，每次10min。
5） 室温条件下，用丙酮（≤ -20℃）脱水或者用0.5% Triton X-100 溶液透化处理5min。
6） 室温条件下，用PBS 清洗细胞2~3 次，每次10min。
7） 取200μl 配制好的TRITC 标记鬼笔环肽工作液，覆盖住盖玻片上的细胞，室温避光孵育30min（通常情况下，4℃~37℃孵育皆可）。
注意：为了降低背景，可于TRITC 标记的鬼笔环肽工作液内加入1% BSA；另外，孵育过程中为了避免溶液挥发，可将盖玻片转移到一个密封的容器内。
8） 用PBS 清洗盖玻片3 次，每次5min。
9） 使用200μl DAPI 溶液（浓度：100nM）对细胞核进行复染，约30s。
10) 用PBS 清洗盖玻片，然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂，然后用指甲油永久封片。此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存，通常6 个月内可继续做F-actin 染色分析。
注意：也可以直接使用含有DAPI 的抗荧光淬灭封片剂合并步骤9）10），简化步骤。
11) 荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择TRITC 激发/发射滤片（Ex/Em=540/570nm）和DAPI 激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。