产品详情
0.5M TCEP (pH6.8)
货号：D00040
规格：10mL
保存：-20℃，1年有效。
产品说明：
TCEP是一种高效、无异味、不含硫醇基的水溶性还原剂，可选择性还原多肽或蛋白质中的二硫键。TCEP具有更佳的稳定性、更广的兼容性、更强的还原性、更好的选择性，而且由于不含巯基，因此在多数应用中不必去除，从而广泛应用于生物化学和分子生物学中，特别是在蛋白质化学、蛋白质组学中，是公认的DTT的良好替代物。
TCEP对还原二硫键选择性极强，除半胱氨酸外，几乎不会与其它氨基酸有反应，并且能在更宽的pH值范围包括酸性条件下使用，从而有效减少酰胺键的水解。TCEP的反应活性温和、易溶、毒性小，且更容易操作，在酸性、碱性溶液中的稳定性都很好。
TCEP使用范围广泛，无论是普通的SDS-PAGE中蛋白的还原，还是一些特殊的实验如固相金属离子亲和层析(IMAC)、质谱(PN2257)、Ni柱纯化等其它需要还原二硫键的实验，也特别适用于组氨酸标记蛋白纯化、马来酰亚胺偶联半胱氨酸残基反应，它能够预防半胱氨酸残基形成二硫键，但不像DTT或β-巯基乙醇本身易与马来酰亚胺反应。
在SDS-PAGE电泳中，一般终浓度在25mM左右的TCEP即可足够还原蛋白样品。
操作步骤(仅供参考)：
- 在不含DTT或β-ME的2X SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(100mM Tris，20%甘油，4% SDS，0.005%溴酚蓝，pH6.8)中加入本产品，至TCEP终浓度为50mM，吹打或斡旋混匀。
- 将等体积的上述2X SDS-PAGE蛋白上样缓冲液与蛋白提取液加入到新的离心管中并混匀，沸水浴中煮5min。
- 样品冷却后，在离心机中瞬离，然后取上层溶液进行Western blot实验。
注意事项：
- 本产品用于蛋白变性时，建议95℃水浴或PCR仪加热5分钟，温度过高(如100℃)或时间过长(如超过15分钟)，有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。
- 本产品在磷酸盐缓冲液中，尤其在中性或碱性磷酸盐缓冲液中很不稳定。因此若实验过程需将本产品配制在PBS缓冲液中使用，必须现配现用。
- 大多数蛋白无需变性剂即可高效还原，但加入盐酸胍等变性剂有助于将内部二硫键暴露而易于和TCEP发生反应。
- 不建议使用尿素作为变性剂，避免形成氰酸酯并与巯基反应。
- 尽量防止金属接触TCEP溶液，否则会一定程度降低TCEP活性。在还原过程中向样品缓冲液中加入5至20mM EDTA有助于防止巯基被二价金属离子氧化，如Zn2+、Cu2+和Mg2+等。
- 还原后样品应尽快使用，长时间放置后会重新生成二硫化物。
- 本产品在溶液中带电荷，因此不适用于等电聚焦(IEF)实验。
- TCEP对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。