20×快速转膜液

20×快速转膜液

货号：D00470

规格：500mL

保存：RT，有效期12个月。

产品简介：

20×快速转膜液用于Western Blot 湿转法转膜，能高效快速地将蛋白转移到印迹膜（PVDF或硝纤膜）上。湿转法(Tank blot)或半干转法(Semi-dry blot)都可以使用。

操作步骤(仅供参考)： 

转膜前的准备：5-6张裁好的滤纸;裁好的转印膜；足够的1×快速转膜液。

湿转法(Tank blot)

1、配制1×快速转膜液

1升1× 快速转膜液:取50ml 20X 超快转膜液，加入750m1双蒸水，混匀之后加入200ml甲醇，混匀即可。现配现用，配好后置于冰上存放。

2、将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。

3、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。

注意:在使用6%或8%分离胶转移大分子蛋白时，应该降低甲醇含量至10%，以获得更好转移效果。

4、按顺序做好转印三明治结构。

注意:

①要彻底清除三明治结构中的气泡，适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。

②PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。

③三明治结构的制作不能太紧,也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的

话，可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。

5、将三明治结构放于转移槽中。

半干转(Semi-dry blot)

1、按照下表配制1×快速转膜液。

2、将滤纸浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。

3、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。

注意:水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。

4、按顺序做好转印三明治结构。

半干转时，滤纸、胶、膜之间的大小，一般是下层滤纸>=膜>=胶>上层滤纸。上下两层的滤纸一定不能接触；滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。

注意: PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。

转移条件

1. 湿转

推荐使用恒流转移，电流可设置350-400mA, 转膜液中离子成分较多，可以承受大电流，并且发热量较低。

注:不推荐使用恒压转移，因转膜液中离子成分较多，当电压在100v左右时，电流会达到400mA,

此时已达到普通电泳仪器最大电流，随着时间延长，可能无法达到稳定的100v电压。

1. 半干转

注意事项： 

1.  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。