Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒

货号：D00590

规格：25块/50块/100块PAGE凝胶

保存：2-8℃，避光，有效期1年。

产品内容：

本产品所提供的PAGE 胶凝固剂为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成10%PAGE 胶凝固剂溶液（0.5g PAGE 胶凝固剂加5mL双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。

产品简介： 常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白，对于相对分子量小的，尤其是10 kD 以下的蛋白分辨率极低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1-10 kD的蛋白及多肽，成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。本产品包括Tricine-SDS- PAGE 凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的凝胶，方便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

配胶说明： 根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE 分离胶配制浓度，凝胶浓度配方参考附表。

I 配制分离胶

1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C 、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。

2、加入10% PAGE 胶凝固剂和PAGE 胶促凝剂，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液（1 mm mini-geL，分离胶溶液加约4 mL），然后在分离胶溶液上轻轻 覆盖一层1-3 cm的水层，使凝胶表面保持平整。

4、静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制夹层胶

去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。

1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。

2、加入10% PAGE 胶凝固剂和PAGE 胶促凝剂，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

3、将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面（对于1mm的mini-geL，夹层胶溶液加约1 mL），然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层，使凝胶表面保持平整。

4、静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

III 配制浓缩胶

去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。

1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。

2、加入10% PAGE 胶凝固剂和PAGE 胶促凝剂，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

3、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

4、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。

5、进行电泳操作。

IV 电泳

将电泳槽放入4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液，内槽加入阴极缓冲液，30V预电泳10min，将样品（已经过Tricine专用上样缓冲液处理）加入点样孔后30V电泳1小时，100V电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。

注意事项：

1. 10% PAGE 胶凝固剂配制后分装-20度保存。PAGE 胶凝固剂溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用-20度保存的10% PAGE 胶凝固剂。
2. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
3. 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。
4. 丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
5. 本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。