DNA非变性PAGE制胶及电泳试剂盒说明书
货号: D01270
规格说明：配置终浓度8%的胶可以配置1L，终浓度20%的胶可以配置400mL。
保存：Acr-Bis溶液4℃保存，有效期1年
产品组成：
名称 | 规格 | 保存 |
40%Acr-Bis(29:1) | 100ml×2 | 2-8℃ |
PAGE胶凝固剂 | 5×0.1g | RT |
PAGE胶促凝剂 | 1ml | RT，避光 |
上样缓冲液 | 1ml | 2-8℃ |
10×电泳缓冲液 | 125ml×2 | RT |
说明书 | 1份 |
产品说明（仅供参考）:
本产品仅用于科研，不可用于其他。
注意：胶凝固剂为固体粉末，使用前配制成10%溶液（0.1 g 粉末加1mL双蒸水）。胶凝固剂溶液最好现配现用，通常4℃可保存一周，-20℃保存6个月。
操作步骤:
用于SSCP-PCR分析的非变性 PAGE电泳（其他应用请相应修改参数）
一、PAGE浓度和交联度的选择指南
1.DNA-PAGE一般推荐用29: 1（丙烯酰胺:甲叉双丙烯酰胺）的交联度，在此条件下，DNA片段和最适PAGE浓度对应关系如下:
单链DNA长度 | 最佳PAGE浓度 | 二甲苯青FF迁移率对应的长度 | 溴酚蓝迁移率对应的长度 |
6-100nt | 20% | 45nt | 12nt |
25-150nt | 15% | 60nt | 15nt |
40-200nt | 12% | 70nt | 20nt |
60-400nt | 8% | 160nt | 45nt |
80-500 | 5% | 260nt | 65nt |
1000-2000nt | 3.5% | 460nt | 100nt |
二、胶制备DNA-PAGE胶（参照附表)
1．参照附表的配置合适浓度的 PAGE胶，摇晃混匀。
2．将配置好的胶倒入胶板，在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
3.室温聚合30-60 分钟（低温抑制聚合反应，故最好室温）。
4.待胶凝固后拔出梳子，用0.5×TBE液冲洗加样孔。
三、样品处理
对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品:将样品跟上样液1:1混合，95℃ 3分钟变性，然后放冰上待用;对 TGGE样品:可以直接上样。
四、电泳
1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
2．预电泳5-30分钟后，将冰上放置的样品上样。
3.连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率〈固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制）。对小胶一般用5-6W固定功率，大胶用15-25W固定功率。
4.终止电泳，取出凝胶进行后续的处理（如银染）。注意:如果银染，必须延长固定时间以便洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。
注意事项:
1.APS溶液不稳定，每次取用后立即放回冰箱，以防失效;若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换10% APS。
2.PAGE 凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关;可通过改变APS及TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作。
3.在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
4.丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿戴实验服和一次性手套。
5、我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
6、产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。