Native-PAGE 非变性丙烯酰胺凝胶快速制备试剂盒
货号：D01400
规格：25T/50T
保存：2-8℃，避光，有效期1年。
产品组成：
25T | 50T | 保存条件 | |
30%Acr/Bis(29:1) | 100mL | 100mL×2 | 4℃，避光 |
1.5mol/L Tris(pH8.8) | 100mL | 100mL×2 | 常温 |
1.0mol/L Tris(pH6.8) | 30mL | 60mL | 常温 |
PAGE胶凝固剂 | 1g | 2g | 干粉4℃；溶液-20℃ |
PAGE胶促凝剂 | 0.8mL | 1.5mL | 4℃，避光 |
*使用前按每克PAGE胶凝固剂加蒸馏水10mL配置成10%溶液，并分装成小体积后冻存于-20℃。
产品说明：
本产品包括提供了配制非变性凝胶所需的各种试剂，用户需自备制胶器和Distilled Water，即可配制非变性胶进行蛋白质电泳。本试剂盒中不含SDS，可进行非变性电泳。本试剂盒约可配制25/50块常规大小的PAGE胶。
操作步骤(仅供参考)：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶浓度，最佳凝胶浓度见附表。
一、灌制分离胶（各试剂使用量见附表3）
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
注：上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2、将不同体积的30%Acr/Bis(29:1)、1.5mol/L Tris(pH8.8)和双蒸水在烧杯或试管中混合。
3、加入10%PAGE胶凝固剂和PAGE胶促凝剂，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。）
5、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。
二、灌制浓缩胶（各试剂使用量见附表2）
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、1.0mol/L Tris(pH6.8)和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%PAGE胶凝固剂和PAGE胶促凝剂，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。
附表2. 配制5%浓缩胶
凝胶体积 | 所需各组分体积（单位：ml） | ||||
纯水 | 30%Acr/Bis(29:1) | 1.0mol/L Tris(pH6.8) | 10%PAGE胶凝固剂 | PAGE胶促凝剂 | |
5ml | 3.42mL | 0.83mL | 0.625mL | 75μL | 7.5μL |
附表3. 配制分离胶
凝胶浓度 | 凝胶体积 | 所需各组分体积（单位：ml） | ||||
纯水 | 30%Acr/Bis (29:1) | 1.5mol/L Tris(pH8.8) | 10%PAGE胶凝固剂 | PAGE胶促凝剂 | ||
6% | 10ml | 5.3 mL | 2 mL | 2.5mL | 100μL | 10μL |
8% | 10ml | 4.6 mL | 2.7 mL | 2.5mL | 100μL | 10μL |
10% | 10ml | 4.0 mL | 3.3 mL | 2.5mL | 100μL | 10μL |
12% | 10ml | 3.3mL | 4 mL | 2.5mL | 100μL | 10μL |
15% | 10ml | 2.3mL | 5mL | 2.5mL | 100μL | 10μL |
注意事项：
1、10%PAGE胶凝固剂配制后分装-20℃保存。10%PAGE胶凝固剂溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；10%PAGE胶凝固剂溶液在4℃有效期为一周。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的PAGE胶凝固剂溶液。
2、PAGE胶促凝剂易挥发，使用后请盖紧瓶盖。
3、PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及PAGE胶凝固剂、PAGE胶促凝剂的用量密切相关；在其它条件不变的情况下，可通过改变PAGE胶凝固剂及PAGE胶促凝剂的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作；附表中的PAGE胶凝固剂、PAGE胶促凝剂的用量可供参考，应根据实际操作情况做适当的调整。
4、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
5、在分离胶上层加纯水时要小心操作，加水时速度不能太快。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
附表
附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
SDS- PAGE 分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6%胶 | 50-150 kD |
8%胶 | 30-90 kD |
10%胶 | 20-80 kD |
12%胶 | 12-60 kD |
15%胶 | 10-40 kD |