糖蛋白凝胶PAS染色试剂盒

糖蛋白凝胶PAS染色试剂盒说明书

货号: D01990

规格：3×500mL

保存：2-8℃，避光保存，有效期6个月。

产品组成：

注：阳性对照若需要长时间保存建议放置-20℃分开保存，使用前加入2mL 1×SDS-PAGE上样缓冲液配置成浓度为1mg/mL，然后分装成100uL/管共10管，留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。

产品说明（仅供参考）:

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamidegel electrophoresis, PAGE)作为最常用和有效的分离技术，也广泛应用于多糖及其复合物的分离和鉴定。如今多糖染色的方法主要有PAS染色、阿利新蓝染色和荧光染色法。PAS染色法原理是利用高碘酸(HIO₄)作为氧化剂，破坏多糖化合物结构的C-C键，把多糖氧化成为高分子醛化合物，生成的醛类化合物与 Schiff 试剂结合，产生紫红色复合物。

糖蛋白凝胶PAS染色试剂盒是一种便捷、快速和灵敏的比色试剂盒，其可对由聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离出的糖蛋白进行特定染色。通过使用氧化剂处理含有分离的蛋白质的凝胶，将糖蛋白中的顺式二醇糖基氧化成醛基，从而与Schiff试剂结合，最后呈现洋红色的色谱条带。本试剂盒可用于10-15块mini胶的染色，其实际检测灵敏度与靶蛋白糖基化程度相关。

自备材料：

甲醇、蒸馏水、3%冰乙酸溶液

操作步骤（仅供参考）

以制备8×10cm,1.5mm的10% SDS-PAGE凝胶为例，操作步骤如下（染色试剂用量具体以完全浸没凝胶的量而定）：

样品稀释：用5×蛋白上样缓冲液将样品浓度稀释为1mg/mL，SDS-PAGE上样缓冲液终浓度为1×。上样量根据凝胶大小，每条泳道加5-10μL的样品即可，上样前100℃煮沸处理10分钟。

凝胶染色：（见注意事项1）

1. 固定：取出电泳后的PAGE凝胶，加入到装有50%甲醇溶液的器皿中，完全浸泡1h。
2. 洗涤：用蒸馏水洗涤凝胶2次，每次摇床轻轻振荡20分钟。
3. 氧化：将PAGE凝胶转移到装有试剂（A）：氧化剂的器皿中，水平摇床轻轻振荡1h。
4. 洗涤：用蒸馏水充分洗涤PAGE凝胶3次，每次水平摇床轻轻振荡10分钟。（见注意事项3）
5. 染色：将PAGE凝胶转移到装有试剂（B）：染色液的器皿中，水平摇床轻轻振荡30min-1h，直至出现清晰品红色条带。
6. 洗涤：用蒸馏水洗涤PAGE凝胶2次，每次水平摇床轻轻振荡10分钟。
7. 还原：将PAGE凝胶转移到装有试剂（C）：还原剂的器皿中，水平摇床轻轻振荡5分钟。
8. 洗涤：用3%冰乙酸溶液洗涤PAGE凝胶2次，每次5min。
9. 保存：PAGE凝胶保存在3%冰乙酸溶液中。
10. 拍照：尽快拍照保存。（见注意事项5）

染色结果：

注意事项：

1. 使用试剂时，应具体根据器皿大小，加入能够浸没凝胶的使用量，防止反应不充分或凝胶干燥的现象，影响后续试验结果。
2. 氧化时间应充分，氧化时的温度以18-22℃最佳。
3. 氧化后的凝胶一定要经蒸馏水洗净后才能倒入Schiff染色剂，否则残留的氧化剂对染色剂有氧化作用，可将无色品红氧化为紫红色的氧化型品红。后者大量滞留在凝胶中引起本底较深，难以洗脱，影响观察结果。
4. 染色时间建议依据凝胶厚薄和大小决定，可相应缩短或延长染色和洗涤时间。
5. 凝胶保存在3%冰乙酸溶液中，本底会随着时间延长而颜色加深，建议染色后尽快观察并留存染色结果。
6. 产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
7. 期货、-80℃保存、抗体、重组蛋白、效期较短(六个月以内)等特殊产品，一经订购，若无质量问题，恕不予退换！