产品详情
荧光蛋白上样缓冲液说明书
货号: D02080
规格：100μL/1mL
保存：-20℃，有效期12个月。
注：1mL规格包含3管：Instant-Bands, Resuspension Buffer和Enhancing buffer。
100μL规格包含2管：Instant-Bands buffer(Instant-Bands干粉已用Resuspension Buffer重悬)和Enhancing buffer。
只有使用Bis-tris胶时才需要加Enhancing Buffer。
产品说明（仅供参考）:
荧光蛋白上样缓冲液在电泳前的样品处理阶段对SDS-PAGE的蛋白样品进行预染，标记上荧光。实验完成以后，凝胶中或转膜后的蛋白条可直接通过紫外灯、LED灯或其他数字成像系统进行观察和分析，无需染色脱色。荧光蛋白上样缓冲液灵敏度比银染高。稳定性强，背景低。可对所有蛋白进行染色，不影响蛋白的迁移率与电泳图谱。电泳过程中，游离的染料分子与溴酚蓝的迁移速率一致，跑胶结束时移至凝胶末端，背景干净。荧光蛋白上样缓冲液非常适合用于追踪蛋白表达纯化以及Western blot的SDS-PAGE。
使用步骤：
- 1mL规格：请在使用前根据管壁标签上的体积加入resuspension buffer重悬得到Instant-Bands buffer。Resuspension buffer在4℃可能会有沉淀产生，室温下放置至沉淀消失。
100μL规格：直接进行第二步操作。
- 将Instant-Bandsbuffer与待电泳蛋白样品1:2混合。如3μL Instant-Bands buffer+6μL蛋白样品。
- 90-100℃加热上述处理的样品混合液5分钟。细胞或组织样品，加热时间延长至10分钟。确保加热温度>90℃使样品充分受热。
大部分预制胶（Bis-Tris体系除外）可以直接进行下一步。Bis-Tris体系的预制胶(如Life Technology)，需加入20%已处理样品体积的Enhancing buffer。比如，10μL已处理的样品需加入2μL Enhancing buffer。
- 样品可以上样进行电泳了（无需再加Loading Buffer处理）。
- 电泳结束后，将凝胶放至透射仪上进行观察和拍照。透射仪可以是紫外灯，蓝光LED灯或其它凝胶成像系统。如果光源在可见光波长范畴的无需剥胶，因为可见波长范围内的光可以穿透玻璃或塑料材质的胶板。
- (可选的)如果有需要，经荧光蛋白上样缓冲液处理的凝胶仍可进行考染。按标准的考染步骤进行即可。
注意事项：
- 请勿使用该上样缓冲液处理预染的或预处理的蛋白分子量标准。这些产品与荧光蛋白上样缓冲液不兼容。
- 灵敏度影响因素：高pH（大于7）不会影响染色，低pH则会降低染色的效率，如果样品的pH低于5，建议将pH调整至7以上。
- 荧光蛋白上样缓冲液不适合在如下 SDS-PAGE实验中使用：切割蛋白条带用以测序、质谱分析或抗体制备。
- 建议-20℃保存，如果室温放置2-3周，则可添加新的DTT，蛋白条带会重新变得清晰和明亮。添加DTT的终浓度不要超过20 mM。也可以添加其他还原剂TCEP(2mM)，效果也很好。