Bradford法蛋白浓度测定试剂盒 (带附件:BSA标准品 1mL×1支 )

Bradford蛋白浓度测定试剂盒

货号：D02150

规格：2500微孔/10000微孔

保存：开封使用后请密封保存，本试剂盒自订购之日起九个月内有效。

产品内容：

产品简介：

考马斯亮兰G-250染料在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料最大吸收峰的位置（Imax）由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20、60、80低于0.06%。

操作说明：

一．微孔酶标仪法

1. 完全融化蛋白标准品，取10μL稀释至250μL ，使终浓度为0.2mg/mL。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。

2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1mL 5×G250染色液，加入4mL双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

3. 将标准品按0、2、4、6、8、12、16、20μL分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足至20μL。

4. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如做2倍、4倍、8倍等梯度稀释），加20μL到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量体积液体时有误差，标准曲线前面的点可能不很准确，所以尽可能让样品点落在标准曲线1/2后。

5. 各孔加入200μL稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。

6. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。

7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

二．分光光度计法

如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。

步骤如下：

1. 取八支（或者更多）干净的10mL离心管，标记管号。

2. 取100μL BSA加入2.4mL PBS稀释至终浓度为0.2mg/mL。

3. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取10mL 5×G250染色液，加入40mL双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4. 按下表加入试剂(以每孔5mL计，多余的可用于清洗比色皿)

5. 反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD值。如下表：

1. 测定

例如室温反应三分钟后，使用伯乐酶标仪680，单波长，可用570nm测得。

以横轴BSA的终浓度，纵轴OD值，绘制y=ax+c曲线