紫外法蛋白定量试剂盒说明书
货号：D02170
规格：500T
本产品仅供体外研究使用，不得用于临床诊断
产品简介：
蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸，使蛋白质在 270~ 290nm 波长范围内具有吸收紫外光的性质，其中酪氨酸的最大吸收峰为 275nm，色氨酸的最大吸 收峰为 280nm，苯丙氨酸的最大吸收峰为 257nm。在上述波长范围内，蛋白质溶液的吸收 值不其浓度呈正比，可作定量测定。
紫外法蛋白定量试剂盒优点是：操作迅速、简便， 不易受低浓度盐类的干扰；缺点是不标准 蛋白中酪氨酸、色氨酸含量差异较大的蛋白质，准确性较差。样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸 会干扰检测结果。
产品组成：
产品名称 | 规格 | 保存条件 | 说明书 | 有效期 |
紫外法蛋白定量试剂盒 | 250T/500T | RT | 1 份 | 1 年 |
试剂(A): 蛋白稀释液(10×) | 50ml/100ml | RT | 1 份 | 1 年 |
试剂(B): 蛋白标准(BSA) | 2×20mg/3×20mg | RT | 1 份 | 1 年 |
自备材料：
1、分光光度计或酶标仪
2 、96 孔板或离心管
操作步骤(仅供参考)：
1 、 用去离子水或蒸馏水稀释蛋白稀释液(10×)至 1 × ，即为蛋白稀释工作液。取 1 支 20mg 的蛋白标准，加入 20ml 蛋白稀释工作液，即配制成蛋白标准(1mg/ml) ，-20℃保存。2、
标准曲线法：取若干试管或 96 孔板，如下操作以分光光度法为例。选用 1cm 的石英比色 皿，在 280nm 处以第 1 管作为调零点，分别检测各管吸光度，以 A280 为纵坐标，以蛋 白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
蛋白标准(1mg/ml) | 0 | 0.5 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 2.5 | 3.0 | 4.0 |
蛋白稀释工作液(ml) | 4.0 | 3.5 | 3.0 | 2.5 | 2.0 | 1.5 | 1.0 | 0 |
蛋白浓度(mg/ml) | 0 | 0.125 | 0.250 | 0.375 | 0.500 | 0.625 | 0.750 | 1.000 |
取 1ml 待测蛋白加至 3ml 的蛋白稀释工作液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定 A280。
根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
3 、Lowry-Kalckar 法(又称 280nm 和 260nm 吸收差法)：对于含有核酸的蛋白质，无需制 作标准曲线。以蛋白稀释工作液作为调零点，取 1ml 待测蛋白加至 3ml 的蛋白稀释工作 液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定 A280 和 A260。根据经验公式计算出待测样品的蛋 白浓度，如果蛋白浓度过高应用蛋白稀释工作液稀释后再行检测。
蛋白质浓度(g/L)=1.45×A280-0.74×A280
4 、 Waddell 法(又称 215nm 和 225nm 吸收差法)：对于蛋白质含量较少的溶液，适用于 该法。取若干试管或 96 孔板，如下操作以分光光度法为例。以蛋白稀释工作液作为调零点， 取 1ml 蛋白标准(1mg/ml)加至 3ml 的蛋白稀释工作液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定 A215 和 A225。以 215nm 不 225nm 吸光度值之差(D=A215-A225)为纵坐标，以蛋白浓度 为横坐标，绘制标准曲线，再测出未知样品的吸收差，即可由标准曲线查出未知样品的蛋白 质浓度。或者丌用制作标准曲线，直接按照如下经验公式计算：
蛋白质浓度(g/L)=144×(A215-A225)。
注意事项：
1、蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白稀释工作液，该液中含有防腐剂，丌影响后续检测，该 蛋白标准液-20℃保存。
2、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测 蛋白不蛋白标准中所含非蛋白成分丌一致，有可能导致测定丌准确。
3 、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，但应考虑根据比色皿的最小检测体积。
4 、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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