Triton-SDS 细胞裂解液
货号：D02760
保存：-20℃，有效期12个月
产品内容：
Triton-SDS Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
产品说明：
Triton-SDS 细胞裂解液由 Triton X-100、SDS、Tris-HCl 等组成，并含有蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。作用原理是利用 TritonX-100 破坏脂质双分子层，溶解胞质和细胞膜，破坏分子间微弱结合键的大部分蛋白质抗原。其浓度在 0.1%～1%时即可满足几乎所有溶解的需求，且可补充等离子浓度的盐及使pH 接近中性。所获得的蛋白质可以用于 PAGE 电泳，Western，免疫沉淀（Immunol Precipitation，IP）和免疫共沉淀（co-IP）等。不宜用 Bradford 法测定由 Triton-SDS 细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。
操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁培养细胞
1、取 Triton-SDS Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、去除培养液，用 PBS、NS 或无血清培养液清洗 1 次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
3、按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例加入 Triton-SDS Lysis Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解，通常裂解液作用于细胞 1～3s 内，细胞就会被裂解。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。
4、10000～12000g，4℃离心 5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、取 Triton-SDS Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 Triton-SDS Lysis Buffer。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。
4、10000～12000g， 4℃离心 5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)组织样本
1、取 Triton-SDS Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。
3、取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
4、按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解 15～30min。
5、步骤 3、4 亦可以采用如下过程：按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Triton-SDS Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
6、10000～12000g，4℃离心 5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
7、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项：
1、去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
2、如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
3、如果细胞量较多，必需分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
4、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
5、溶解 Triton-SDS Lysis Buffer 时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。
6、裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验。如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。
7、细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。
8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。