血清蛋白提取试剂盒说明书
货号: D03595
规格：50T/100T
保存：2-8℃保存，有效期一年
产品内容：
名称 | 50T | 100T | 储存条件 |
试剂 A：蛋白提取液 A | 10mL | 20mL | 2-8℃保存 |
试剂 B：蛋白稀释液 B | 15mL | 30mL | |
试剂 C：蛋白酶抑制剂混合物 C | 100uL | 200uL | -20℃保存 |
注：
1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 试剂拆封后请尽快使用完！
产品简介：
血清蛋白提取试剂盒提供适用于从各种动物血清中提取总蛋白。
本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供 了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting 、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA 、转录活性分析、 Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA ，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐分，不可直接用于2D电泳，可将最后样品除盐后用于2D电泳。
自备试剂和仪器
离心机、振荡器、匀浆机/匀浆器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒，PBS缓冲液、蛋白定量试剂 盒，离心管、吸头、一次性手套
产品特点：
1、使用方便，将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟。
2、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种独 立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成 使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋 白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
使用方法：
- 使用注意事项：
1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
2.实验过程中的所有试剂须预冷：所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
5如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
6.本试剂盒提取的是血清总蛋白，含有高丰度的白蛋白。电泳前可以蛋白稀释液稀释至约5ug/μL。
7.电泳加loadingbuffer后水煮时，蛋白液有时会变得非常粘稠，可以用65°C保温10分钟代替沸水煮。
8.对于某些目的蛋白在血清中含量很低的情况，或者目的蛋白与白蛋白分子量相近的情况，需要先去除白蛋白。
二、操作步骤
1提取液准备：
每200μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】:
- 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
2）加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
3）以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
2. 取非抗凝全血样品，在4C，3000rpm条件下离心10min，弃细胞沉淀，留上清。
3. 取上清血清样本，每100μl血清样本中加入200μl蛋白提取液，充分混匀后，在4℃C条件下振荡5-10分钟。
【注】:
1）使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
2）没有振荡条件也可以不振荡，置2-8℃静置，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
4. 在4°C，14000×g条件下离心5分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到血清蛋白。
6. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80C冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】
- 建议用BCA法进行蛋白定量。
2）蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
7. 根据相关实验要求用蛋白稀释液或其他缓冲液稀释血清蛋白样品至所需浓度。
【注】:
1）血清蛋白浓度较高，一定要根据蛋白定量的情况稀释至合适的浓度再用于电泳等下游实验应用。
常见问题
①用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如 果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
②提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏， 蛋白均保持其天然构象和活性。
注意事项：
1.正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3.禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4.样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5.最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
7.本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
8.避免皮肤或粘膜与试剂接触。