TTC,2,3, 5氯化三苯基四氮唑

2,3,5氯化三苯基四氮唑说明书

货号:E08260

规格：1g/5g/25g

英文名称：TTC；2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride

别名：2,3,5三苯基氯化四氮唑，红四氮唑，四氮唑红，红四唑

CAS:298-96-4

分子式：C₁₉H₁₅ClN₄

分子量：334.81

外观：白色至浅黄色粉末

纯度：≥98.0%

级别：Reagent Grade

溶解性：0.4%用Pb溶解，2%用Pb溶解

保存：2-8℃保存，有效期3年。

产品说明(仅供参考):

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

2,3,5氯化三苯基四氮唑，又称四唑红，简称TTC，TTZ，或TPTZ，一种脂溶性光敏感复合物，既可用来检测种子的生存能力，也可用来检测哺乳动物组织的缺血梗塞。检测机制在于TTC本身可作为一种氧化还原指示剂，活细胞内的脱氢酶(尤其是线粒体内的琥珀酸脱氢酶)可以将TTC还原为红色甲臢化合物TPF(1,3,5-triphenylformazan)。对于种子或者植物组织来说，染色结果为活组织被染成不同程度的红色，死组织或者无生命力的组织不着色。对于缺血梗塞组织，因组织坏死脱氢酶活力丧失呈现苍白色，而正常组织呈深红色。TTC常用的染色浓度为2%(w/v)(Cat:RS4130)，也可根据组织类型做浓度的适当调整。

使用说明(仅供参考):

1. 染色工作液的配制(动物组织，仅供参考)

TTC通常用PB磷酸缓冲盐溶液来配制，pH范围为6.5-7.5之间，常用浓度为0.4%-2%，一般浓度不宜大于2%，具体浓度根据不同实验要求而定，配制好的TTC溶液要避光保存。可使用以下的缓冲盐体系配制：

1. 取9.078g KH₂PO₄(Mw:136.09)溶于1L去离子水内，制备成66.7mM KH₂PO₄储存液；取10.9472g Na₂HPO₄·H2O(Mw：159.974)溶于1L去离子水内，制备成68.6mM Na₂HPO₄储存液；将两份KH₂PO₄储存液与1份Na₂HPO₄储存液充分混合，即得到需要的PB磷酸缓冲液溶液。
2. 根据需要的TTC工作液浓度来制备，如加入2g TTC粉末到100mL混合的PB磷酸盐缓冲液中，即得到2%的染色工作液。此时的溶液pH值在6.5-7.5之间。此工作液可装到不透明的白色瓶或者棕色瓶子内，4℃保存几个月稳定。
3. 注意：TTC染色液的缓冲体系可根据自己的实验习惯来调整；也可用去离子水来溶解配置成10mg/mL的储存液，过滤除菌，建议此法染色液当天使用。
4. 动物组织染色(以小鼠脑组织染色为例)
5. 麻醉小鼠，取小鼠脑组织，用生理盐水洗净，-20℃冷冻20min左右。
6. 切片：一般切成5-6片，每隔2mm切一片。第一刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。
7. 将切好的小鼠脑片放入TTC溶液。
8. 37℃避光孵育15-30min，孵育过程中可每隔10min小心的翻动脑片，边孵育边观察颜色变化。

注意：TTC染色液可重复使用2-3次，可将用过的TTC染色液放到新的容器内继续使用。

1. (可选)轻柔的吸取缓冲液(如1×PBS)将组织表面多余的染色液冲洗掉。
2. 此时即可观察或者拍照。若需长久保存，用4%多聚甲醛溶液(Cat:PN4204)固定10-20min。
3. 结果判断：正常组织被染成红色，梗死区呈灰白色。
4. 植物样本染色
5. 将待测种子用温水(30-35℃)浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
6. 随机取种子100粒，沿种胚中心线纵切为两半，将每粒种子的一半分别置于两个培养皿中，备用。
7. (可选)可将其中一半种子置于沸水中煮沸5min，杀死细胞，作为阴性对照。
8. 向含有种子的培养皿中加入TTC溶液，以浸没种子为度。
9. 放入30-35℃的恒温箱内保温30min-1h。
10. 倒出TTC染色液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种子着染色情况。
11. 结果判断：有活力的种子被染成红色，阴性对照和无活力种子不被染色。

注意事项：

1. 本品具有微量的光和热敏感性，使用以及存放的过程中避免长时间曝光或者接触到过高温度下。
2. 本品不适合用PBS溶解。
3. 脑组织切片时间尽可能的短，时间过长会影响脑组织表面脱氢酶的活性从而影响染色效果。
4. TTC使用浓度根据具体实验要求而定。
5. TTC染液可反复染色2～3次，若溶液变红色则不可再用。
6. 染色时要使组织切片全部浸入TTC染色液中。翻动脑片时一定要小心，以免破坏脑片形态。
7. TCC染色后应立即观察，不可久放。若需长久保存，可用4%多聚甲醛固定。
8. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
9. 产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
10. 期货、-80℃保存、抗体、重组蛋白、效期较短(六个月以内)等特殊产品，一经订购，若无质量问题，恕不予退换！