D-荧光素钾盐

D-荧光素(钾盐)说明书

货号：E17320

规格：25mg/100mg/1g

英文名称：D-Luciferin，Potassium Salt

CAS：115144-35-9

分子式：C₁₁H₇N₂O₃S₂K

分子量：318.42

外观：淡黄色至黄色粉末

纯度：﹥99%(HPLC)

级别：分子生物学级(超纯)

溶解性：100mg/mL in water

保存：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

产品说明（仅供参考）:

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，D-荧光素(底物)被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染进入细胞后，导入研究动物如大小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

D-荧光素常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。

使用说明（仅供参考）

1. 体外生物发光检测
2. 储存液制备

用蒸馏水溶解D-荧光素(钾盐)，配制成15mg/mL的储存液(100×)，0.2μm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融，1年有效。建议使用的工作液浓度为150μg/mL(相当于468mM)。

1. 荧光素酶反应缓冲液制备

荧光素酶反应缓冲液(2×):100mM Tris-HCl(pH 7.8)，5mM MgCl₂，250μM CoA，150μM ATP。具体缓冲液组成可参考其他文献资料来调整。

1. 操作使用：避光解冻。去除培养细胞的培养基直至无残留。待图像分析前，向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析(或者细胞放在37℃短时间孵育约5min后检测可增强信号)
2. 萤火虫荧光信号检测

以注射式冷光测定仪(injectible luminometer，单样或微孔板，200μL终体积)为例：

1. 吸取100μL荧光素酶反应缓冲液(2×)到一干净的冷光测定仪比色皿或96孔板的各孔(最好使用全白平底的96孔板)；
2. 吸取50~98μL裂解上清到皿或孔内；
3. 如果有需要，用水来补足使得总体积到198μL；
4. 设置程序注射2μL荧光素储存液(使工作浓度150μg/mL)，程序：2~5秒延迟(delay)，之后10s测定。
5. 注：萤火虫荧光信号的检测方法大体上取决于冷光测定仪(luminometer)类型(是手动型荧光计、单管注射型或者酶标板读数型荧光计)。根据特定发光测定仪，来考虑注射用量和程序设置。需设置不含荧光素酶的孔(用作阴性对照)，以测定背景荧光。
6. 活体成像分析
7. 用无菌的PBS(w/o Ca²⁺、Mg²⁺)或者D-PBS(w/o Ca²⁺、Mg²⁺)配制D-荧光素(钾盐)工作液(15mg/mL)，0.2μm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到2-8℃避光解冻。

注：钙镁离子可能会抑制某些蛋白酶的活性。此外Mg²⁺是催化荧光氧化的重要因素，Ca²⁺是和腔肠素氧化有关的离子。其他的盐溶液也可用来溶解荧光素，但要避免溶液中的阳离对实验造成影响。推荐用不含Ca²⁺或Mg²⁺的磷酸盐缓冲液。

1. 注射量取决于注射方式，具体如下：（仅供参考）

1. 注射入体内10-20min(待光信号达到最强稳定平台期)，再进行成像分析。
2. 注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。荧光素可通过腹腔注射或尾部静脉注射注入小鼠体内。约1min可扩散到小鼠全身。大部分情况下使用荧光素浓度为150mg/kg。对于20g的小鼠约使用3mg的荧光素即可。对于腹腔注射来讲，扩散较慢，开始发光较慢，持续发光时间较长。对于荧光素的尾部静脉注射，扩散快，开始发光快，但发光持续时间较短。

注意事项：

1. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
2. 产品信息仅供参考。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
3. 期货、-80℃保存、抗体、重组蛋白、效期较短(六个月以内)等特殊产品，一经订购，若无质量问题，恕不予退换！