碘化丙啶PI
货号: E19470
规格: 10mg
英文名称: Propidium Iodide
CAS: 25535-16-4
分子式: C27H34I2N4
分子量: 668.39
外观（性状）: 红色粉末
纯度：≥95%
溶解性: 可溶于水，1mg/mL
保存条件: 2-8℃，有效期4年。
产品说明:
本产品仅用于科研，不可用于其他。
荧光染料PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是Propidium Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。
Propidium iodide已经证明了对神经元没有毒性作用，是目前最常见的膜完整性和细胞存活率的标志物，在固定前应用(预固定Propidium iodide染色法)。前固定化染色已被广泛应用于急性神经退化模型神经元细胞下降的定量评估，其形象化表现为被强烈标记为PI+-固核的退化神经元胞核。Propidium iodide不能穿过活细胞的细胞膜，通过流式细胞仪分析来测量凋亡细胞的百分比。流式细胞仪数据与电泳法和比色法的结果有很好的相关性。这种新的快速、简单、可复制的方法可用于评估异质性组织如骨髓、胸腺和淋巴结的细胞凋亡。
操作步骤（仅供参考）：
1.储存液的配制：称取1mg PI粉末（M. Wt= 668.4），用1mL去离子水充分溶解后配置成1mg/mL（1.5 mM）的储存液。4℃避光保存，至少6个月稳定。
2.贴壁细胞复染步骤（荧光显微镜检测）
样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。PI染色一般在其它染色完成后再进行。PI复染要求细胞经透化处理。
RNase酶处理：若样本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，则需要进行RNase处理。若样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。
a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；
b，将本品置于含有100 μg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37℃孵育20min；
c，用2×SSC溶液清洗样本3次，每次1min。
复染：
a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；
b，直接用2×SSC秲释1mg/mL（1.5 mM）PI储存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300μL染液足够用于一个盖玻片细胞制片。染色1-5min。
c，2×SSC清洗几次，流尽多余的缓冲液后，加入抗淬灭剂封片。
d，选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。
3.悬浮细胞复染步骤（流式细胞仪检测）
样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。或者使用如下的步骤：
a， 收集一定量的细胞，密度约 2×105 ~1×106。离心收集细胞，吸掉上清液，用手轻弹管壁就剩下的液体重悬细胞。之后加入1mL常温存放的PBS；
b， 将所有的重悬细胞转秱到4mL于-20ºC预冷的无水乙醇，在高速涡旋混匀的同时一边用枪缓慢的添加细胞悬液到乙醇内。于-20ºC乙醇中固定5-15min。离心收集细胞，除去乙醇。用手轻弹管壁以弹松细胞后，加入5ml室温的PBS。允许细胞水化15min；
复染
a，用秲释液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% NP-40）秲释1mg/ml（1.5 mM）PI储存液 1:500，得到3 μM的PI工作液。1ml的PI染色液足够用于每个细胞样本的检测。
注：工作液的使用浓度可以根据自身实验体系调整，也可以直接使用PBS，HBSS等缓冲液直接秲释PI储存液到需要的浓度。
b， 样本制备的最后一步后离心收集细胞，去除上清，用手轻弹管壁以弹松细胞后，加入1ml的PI染色工作液。室温孵育15min后，流式细胞仪进行细胞分析。若用流式显微镜观察，则需要离心样本，去除上清并重悬细胞在新鲜的缓冲液中。吸取1滴悬液到载玻片上，盖上盖玻片后观察。
4.染色质FISH复染步骤
样本准备：根据标准步骤制备样本。复染之前的最后一步用去离子水清洗样本以去除玻片上残留的缓冲液。室温晾干。此步骤有利于减少非特异性的背景染色。
复染
a，工作液的配制：用PBS缓冲液直接秲释1 mg/ml（1.5 mM）的PI储存液1:1000，得到1.5 μM的PI染色工作液。滴加300μL的工作液直接到样本。有必要的话，工作液内加入新鲜制备的RNase A（终浓度：10 μg/mL）。可使用塑料盖玻片均匀分布染液在载玻片上。室温避光条件下孵育样本30 min；如果加入RNase则37℃孵育。
b. 去除盖玻片，用PBS或去离子水清洗以除去没有结合的染料；
c.用吸水纸巴围绕着样本周围吸取残留液体，盖上玻璃盖玻片后用石蜡或者者指甲油封住盖玻片边缘。也可用抗荧光淬灭剂进行封片。
d. 选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。
注意事项:
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。