Taq DNA Polymerase(含10× PCR buffer,预混氯化镁)说明书
货号： M00010
浓度：5U/μL
保存条件: -20℃保存，有效期4年
产品组成：
Taq DNA Polymerase(5U/μL) | 500U | 1000U | 2.5kU | 5kU |
10×PCR buffer(含Mg2+) | 1mL | 1mL×2 | 1mL×5 | 1mL×10 |
注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM镁离子。
产品说明（仅供参考）:
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
Taq DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶。其基因来源于Thermus aquaticus polymerase。该蛋白分子量为94 kDa，具有5′→3′ DNA聚合酶活性和5′→3′外切酶活性，无3′→5′外切酶活性，酶延伸速度2 kb/min，可以扩增长度达5 kb的片段。扩增得到的PCR产物3′端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高的特点，主要适用于PCR法扩增DNA片段、DNA序列测定等实验。
产品简介
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位（U）。
活性定义
经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性； PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一个月，无明显活性改变。
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
试剂 | 50 μl反应体系 | 终浓度 |
10× PCR Buffer | 5 μl | 1× |
dNTP Mix，10 mM each | 1 μl | 200 μM each |
Forward Primer，10 μM | 2 μl | 0.4 μM |
Reverse Primer，10 μM | 2 μl | 0.4 μM |
Template DNA | <0.5 μg | <0.5 μg/50 μl |
Taq DNA Polymerase，5 U/μl | 0.25-0.5 μl | 1.25-2.5 U/50 μl |
ddH2O | up to 50 μl |
注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引
物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2. PCR反应条件
步骤 | 温度 | 时间 | |
预变性 | 94℃ | 2min | |
变性 | 94℃ | 30s | |
退火 | 55-65℃ | 30s | 25-35个循环 |
延伸 | 72℃ | 30s | |
终延伸 | 72℃ | 2min |
注意：
1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2）延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。