Pfu DNA Polymerase (含10× PCR buffer 预混氯化镁 )

Pfu DNA Polymerase 说明书

货号: M00030

规格: 500U/1000U

浓度：5U/μL

保存条件: -20℃保存, 有效期至少一年。

产品说明:

Pfu DNA Ploymerase 是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白，其分子量为90kD。由于Pfu 酶具有3’→5’核酸外切酶活性，它能纠正DNA 扩增过程中产生的错配，而传统的Taq 酶却不能，其它耐热DNA Polymerase 如Vent、Deep Vent、Tli、UITma 等虽具有校正功能，但Pfu 酶是目前已发现的所有耐热DNA Polymerase 中出错率最低的。Pfu 酶无5’→3’核酸外切酶活性，PCR 反应中的延伸速度一般为0.5-1kb/min，比Taq 酶要低。Pfu 酶比Taq 酶热稳定性更好，95℃ 1 小时仍保持90%以上的活性，对于GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃而不影响其活性。Pfu 酶的PCR 产物为平末端，可加A 处理再与T-载体连接或使用平末端克隆载体。

活性定义：

1 单位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定义为在74℃，30 分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA 作为模板/引物，将10nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制：

SDS-PAGE 检测Pfu DNA Polymerase 纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR 方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人类基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

酶贮存缓冲液：

50mM Tris-HCl (pH 8.2)；0.1mM EDTA； 1mM DTT；50% glycerol；其他成份。

适用范围：

用于DNA 的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析（SNP）和末端补平等。

建议PCR 体系（以50μL 反应体系为例）

Template <0.5μg

上游引物（10μM） 1μL

下游引物（10μM） 1μL

10×Buffer（含Mg²⁺） 5μL

dNTP Mix（各2.5mM） 4μL

Pfu DNA Polymerase 0.5-1μL

ddH₂O up to 50μL

注意事项：

1、PCR 反应体系加样时，最后一步加入Pfu DNA Ploymerase，整个过程宜在冰上操作。

2、取Pfu DNA Ploymerase 做PCR 反应时，请用高压灭菌处理过的吸头。

3、10×Pfu Buffer 中含20mM Mg²⁺，如PCR 反应需要较高Mg²⁺浓度，请另行加入。

4、用Pfu 酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18 个碱基，Tm 值在55-80℃之间。