T4 DNA Ligase 说明书
货号: M00100
储存条件：-20℃保存，避免反复冻融，10×T4 DNA Ligase Buffer 建议分装使用。
浓度：见标签
来源：重组大肠杆菌
产品内容：
T4 DNA Ligase | 60U |
10×T4 DNA Ligase Buffer | 24μL |
产品说明：
该酶在以 ATP 做辅酶的情况下，可以催化相邻 DNA 链的 5'-磷酸集团和 3'-羟基之间的链接反应。平末端和粘性末端均可。此酶液可以催化双链 RNA 与双链 DNA 连接，但不能催化单链核酸的连接。
活性单位定义：
1个Weiss 活性单位是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、20min 内将1nmol[32PPi]转换为 Norit可吸收形式所需的酶量。1个Weiss 活性单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接 单位：20μL 反应体系（50mM Tris-HCl pH7.5），10mM MgCl2，10mM DTT, 1mM ATP, 25μg/ml BSA, 0.12μM (300μg/ml 的 5'DNA 末端)中，在16℃、30min内50%连接 Hind III 酶切的Lambda DNA产物所需要的酶量。
使用示例：
1、先将10×T4 DNA Ligase Buffer 在冰上融化，并进行短暂的离心。
2、以10μL连接体系示例，在微量离心管中加入以下各种成分：
组成成分 | 体积 |
目的 DNA片段 | 约 0.1pmol |
载体 DNA | 约0.01pmol |
10×T4 DNA Ligase Buffer | 1μL |
T4 DNA Ligase | 0.5-1μL |
ddH2O | 补足至 10μL |
3、16℃连接过夜。
4、将 3-5μL 连接产物转化至 100μL 感受态细胞中。
注意事项：
1、载体 DNA 和连接片段的摩尔比：对于不同的载体和 DNA 片段，要取得成功的连接，应分别建 立具有不同摩尔数比例的连接反应，在大多数情况下，DNA 片段的摩尔数应控制在载体 DNA 摩尔数的 3-10 倍。
2、10×T4 DNA Ligase Buffer 中含有 ATP，为避免 ATP 的降解，建议解冻后分装冻存于-20℃。
3、平末端的载体与 DNA 片段连接时，应首先对载体进行去磷酸化，以防止载体自身环化。
注意：如果向反应体系中加入 PEG 可以促进平末端的连接，但 PEG 可能导致 cDNA 片段克隆产物出现串联体并抑制包装的反应。
附：
10×T4 DNA Ligase Buffer：400mM Tris-HCl pH7.8），100mM MgCl2，100mM DTT, 5mM ATP。
储存 buffer：20mM Tris-HCl(pH7.5)，50mM KCl，0.1mM EDTA，1mM DTT, 50%（v/v）甘油。