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SYBR Green I (PCR级 20× )

货    号 M00500
产品分类 分子生物学
规格与价格
规格 单位 价格(元) 操作
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产品详情

SYBR Green I(PCR级,20X)

货号:M00500

规格:1ml

保存:使用前,将产品室温下解冻,并轻轻涡旋混匀,解冻后所有实

验应在冰上操作。长期-20℃,该产品避免反复冻融。

产品说明:

SYBR Green I 是一种结合于dsDNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发光的荧光染料。SYBR Green I 与dsDNA 结合后荧光信号会增强800-1000 倍,是一种常用的qPCR 荧光染料。该染料经济实惠、使用方便,具有高灵敏度,信噪比高等优势,可应用于基因表达差异分析,基因芯片等。

使⽤说明:

1、建立如下实验体系:(仅供参考)

名称

体积

10×的无Mg2+聚合酶缓冲液

5μL

50mM MgCl2

2.5μL

2mM dNTP

5μL

20×SYBR Green

2.5μL

Taq DNA polymerase

1-5units

F, R Primers

各 0.1-0.5μM

模板 DNA

适量

dH2O

to a final volume of 50μL

注:DNA 模板的添加量通常在100 ng 以下。因不同种类的DNA模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释,确定合适的DNA模板添加量。cDNA作为模板时的添加量不要超过PCR反应液总体积的10%。

2、执行实时定量PCR 程序,采集荧光信号。

程序

温度

时间

循环

酶激活

95℃

2min

1

变性

95℃

5s

45

退火延伸

50-60℃ 72℃

5s

25s

3. 分析数据

注意事项:

1. SYBR Green I 的使用浓度是保证荧光定量PCR 实验成功的关键因素。染料浓度过低会使荧光信号变化降低,导致低拷贝的样品可能无法检出,而在高浓度时又会抑制PCR 反应。所以一般在使用SYBR Green 染料时应根据实际情况优化使用浓度,反应的终浓度为1×到0.2×之间。

2. 提高Mg2+浓度可以降低SYBR Green I 对PCR 反应的抑制作用。我们建议在用SYBR Green I 进行荧光PCR 反应时,Mg2+浓度比无SYBR Green I 的普通PCR 反应高出0.5~3mM。

3. 为了您的健康,请穿实验服并戴一次性手套进行操作。