SYBR Green I(PCR级,20X)
货号:M00500
规格:1ml
保存:使用前,将产品室温下解冻,并轻轻涡旋混匀,解冻后所有实
验应在冰上操作。长期-20℃,该产品避免反复冻融。
产品说明:
SYBR Green I 是一种结合于dsDNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发光的荧光染料。SYBR Green I 与dsDNA 结合后荧光信号会增强800-1000 倍,是一种常用的qPCR 荧光染料。该染料经济实惠、使用方便,具有高灵敏度,信噪比高等优势,可应用于基因表达差异分析,基因芯片等。
使⽤说明:
1、建立如下实验体系:(仅供参考)
名称 | 体积 |
10×的无Mg2+聚合酶缓冲液 | 5μL |
50mM MgCl2 | 2.5μL |
2mM dNTP | 5μL |
20×SYBR Green | 2.5μL |
Taq DNA polymerase | 1-5units |
F, R Primers | 各 0.1-0.5μM |
模板 DNA | 适量 |
dH2O | to a final volume of 50μL |
注:DNA 模板的添加量通常在100 ng 以下。因不同种类的DNA模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释,确定合适的DNA模板添加量。cDNA作为模板时的添加量不要超过PCR反应液总体积的10%。
2、执行实时定量PCR 程序,采集荧光信号。
程序 | 温度 | 时间 | 循环 |
酶激活 | 95℃ | 2min | 1 |
变性 | 95℃ | 5s | 45 |
退火延伸 | 50-60℃ 72℃ | 5s | |
25s |
3. 分析数据
注意事项:
1. SYBR Green I 的使用浓度是保证荧光定量PCR 实验成功的关键因素。染料浓度过低会使荧光信号变化降低,导致低拷贝的样品可能无法检出,而在高浓度时又会抑制PCR 反应。所以一般在使用SYBR Green 染料时应根据实际情况优化使用浓度,反应的终浓度为1×到0.2×之间。
2. 提高Mg2+浓度可以降低SYBR Green I 对PCR 反应的抑制作用。我们建议在用SYBR Green I 进行荧光PCR 反应时,Mg2+浓度比无SYBR Green I 的普通PCR 反应高出0.5~3mM。
3. 为了您的健康,请穿实验服并戴一次性手套进行操作。