PCR 扩增试剂盒
货号：M00520
规格：50T/100T
保存：-20℃,1年
试剂盒组成：
组分 | 50次 | 100次 |
Taq DNA Polymerase (5 U/μl) | 25μl | 50μl |
10× Taq Buffer without MgCl2 | 300μl | 600μl |
dNTP (10 mmol/L) | 60μl | 120μl |
MgCl2 (25 mmol/L ) | 1.0ml | 1.0ml |
Sterilized ddH2O | 2.0ml | 4.0ml |
产品说明：
Taq DNA Polymerase 是从克隆有 Thermus aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的，其分子量为 94 KD。该酶具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和 5’-3’核酸外切酶活性，无 3’-5’外切酶活性。在 PCR 反应中，Taq DNA Polymerase 延伸速度为 1-2 kb/分钟，产物 3’端带A，可直接用于 T/A 载体克隆。该酶无外源核酸酶和细菌基因组 DNA 的污染，稳定性好，特异性强。
使用本试剂盒快速简便，可用于PCR相关的实验室工作。
影响PCR反应的因素很多，即使使用经高度优化的PCR Master 也会遇到问题。如果发现PCR反应没有得所需产物或条带较弱，建议用25mmol/L MgCl2 调节反应体系中的Mg2+浓度，以期获得更好的结果。
使用方法：
1. 模板DNA准备：基因组DNA，反应体系中模板浓度推荐范围1-10μg/ml；质粒或噬菌体DNA浓度0.1-1ng/ml。
2. 在无菌洁净的PCR管中，参考下面体系配制反应溶液。
试剂 | 终浓度 | 50μl体系 |
Sterilized ddH2O | - | 补足 |
10× Taq Buffer without MgCl2 | 1× | 5μl |
dNTP Mix | 0.2mmol/L | 1μl |
Primer 1 | 0.1~1μmol/L | x |
Primer 2 | 0.1~1μmol/L | x |
Taq DNA Polymerase | 1.25 U | x |
MgCl2 | 1~4mmol/L | x |
模板 DNA | 10 pg-1μg | x |
3. 轻轻混匀后短暂离心。
注：在同时进行几个平行反应时，在一个离心管中将单组分混合均匀，分装到 PCR 管中，再依次加入 MgCl2和模板 DNA。4. 加适量的矿物油后，置于 PCR 仪中进行 PCR 反应。
注：对于有热盖的 PCR 仪可不加矿物油。
5. PCR反应循环设置
94℃ 3min
94℃ 30sec
55℃ 30sec 30 cycles
72℃ 500-2000bp/1min
72℃ 5min
6. 结果检测：反应结束后，取5μl反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
注意事项：
1. PCR 能够从很少量的分子开始获得超过 1 千万拷贝数的目标 DNA 序列。其敏感性要求模板不能被实验室环境中其他 DNA 或以前的扩增产物所污染。
2. DNA 模板的准备，反应混合物的调配，PCR 反应过程以及随后的产物分析都应在不同的地方分开操作。
3. 建议使用带有紫外灯的超净台来混合反应混合物。每一步PCR 操作都应该使用新的手套。
4. 要求 PCR 反应所需试剂分开配制。
5. 溶液应分装成小计量单位并保存在指定存放 PCR 试剂的地方。试剂应该与其他 DNA 模板分开存放。
6. 为了确定无污染，应该同时做一个不含 DNA 模板的标准反应。
7. 50 µl 体系不同浓度 Mg2+所需 MgCl2 溶液体积：
Mg2+终浓度 (mmol/L) | 1 | 1.5 | 2 | 2.5 | 3 | 4 |
MgCl2的体积 (μl) | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 8 |
8. 本产品仅供科研使用。