SuperPro Multiplex PCR Mix说明书
货号：M00550
规格：1mL
别名：直扩多重PCR Mix
保存：-20℃，2年
产品内容：
Component | 1 mL |
2.5×SuperPro Multiplex PCR Mix ddH2O | 1 mL 1 mL |
SuperPro Multiplex PCR Mix是一款适用于各种类型多重PCR的预混体系，浓度为 2.5×,包含DNA聚合酶、 PCR Buffer、dNTPs、Mg²+ 以及稳定剂和增强剂等成分，本品只需要加入引物和模板即可进行扩增，操作简单方便，减少了污染几率，提高了检测通量和重现性。
SuperPro Multiplex PCR Mix包含的DNA聚合酶是一种经基因工程改造的重组酶， 具有5’→3’DNA聚合酶活性，无5’→3’外切酶活性； DNA聚合酶经过新型抗体修饰，为 抗体修饰热启动酶，能够有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二 聚体而产生的非特异性扩增，同时具有激活时间短、扩增能力强、灵敏度高、稳定性 好等优良特点。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，
灵敏度更高，抑制物耐受性更强。
SuperPro Multiplex PCR Mix应用范围广，适用于各种类型多重PCR，如微卫星分析、扩增子建库、基因分型以及SNP检测等。
注意事项
1. 使用前请在本品完全融化后上下颠倒轻轻混匀，并经短暂离心后使用。
2. 避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本品可置于-20℃长期保存。
使用方法
1. PCR反应体系
提取DNA扩增反应体系：
试剂 | 25 μL体系 | 50 μL体系 | 终浓度 |
2.5×SuperPro Multiplex PCR Mix | 10 μL | 20 μL | 1× |
5×Primer Mix | 5 μL | 10 μL | 1× |
Template DNA | X μL | X μL | |
ddH2O | Up to 25 μL | Up to 50 μL |
注意：
引物设计时，应尽量减小各引物的Tm间的差值，差值尽量控制在5℃以内。各引物浓度请以终浓度 0.05-0.2 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物浓度；发生非特异性扩增时， 可降低引物浓度，由此优化反应体系。为达到最优扩增效果，建议引物混合物使用前涡旋震荡10 s短暂离心后使用。
2. PCR反应程序
步骤 | 温度 | 时间 | 循环 | ||
预变性 | 95℃ | 2 min | 1 | ||
变性 退火 延伸 | 95℃ 55-65℃ 72 ℃ | 10 s 30 s 1kb/min | 30-40 | ||
终延伸 | 72 ℃ | 5 min | 1 | ||
注意：
1) 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2) 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足;如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
3) PCR产物极易产生气溶胶污染，进而导致实验结果不准确、可信度不高等问题。建议将PCR反应体系配制区和PCR反应区进行物理隔离，使用专用的移液器等设备，并定时对各实验区域进行清洁（使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理)，以保证实验结果的可信度。