FastStar Probe Kit (for bisDNA)说明书
货号: M00700
规格：500U
保存：-20±5℃,尽量避免反复冻融
产品内容：
Component | 500 U |
FastStar Probe Buffer (for bisDNA) | 2×1.2 mL |
SuperFastStar DNA Polymerase (5U/μL) | 100 μL |
产品简介
本产品主要应用于以亚硫酸氢盐处理的DNA为模板的探针法荧光定量PCR 。其中SuperFastStar DNA Polymerase是一种经双单克隆抗体修饰的、全新高效热启动酶，在常温下酶的活性被完全封闭，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或 引物二聚体而产生的非特异性扩增，搭配优化的FastStar Probe Buffer (for bisDNA)包含 PCR Buffer、dNTPs 和Mg2+等，只需客户加入模板，引物， 探针即可，使用方便。
注意事项
1. 使用前请在本品完全融化后上下颠倒轻轻混匀，并经短暂离心后使用。
2. 避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本品可置于-20℃长期保存， 避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2-8℃保存。
使用方法
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和 目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
试剂 | 25 μL体系 | 50 μL体系 | 终浓度 |
FastStar Probe Buffer (for bisDNA) | 14 μL | 28 μL | 1× |
Forward Primer ，10 µM | 0.5 μL | 1 μL | 0.2 μM 1） |
Reverse Primer ，10 µM | 0.5 μL | 1 μL | 0.2 μM1） |
Probe ，10 µM | 0.5 μL | 1 μL | 0. 2 μM2） |
SuperFastStar DNA Polymerase | 0.6 μL | 1.2 μL | |
Template DNA | X μL | X μL | |
ddH2O | Up to 25 μL | Up to 50 μL |
注意：
1）通常引物浓度以0.2 μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。
2）使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照 仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3）通常DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目 的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
2. PCR反应条件
步骤 | 温度 | 时间 | 循环 | |
预变性 | 95℃ | 30 s1) | 1 | |
变性 | 95℃ | 15 s | 40-45 | |
退火/延伸 | 60℃ | 30 s2） | ||
注意：
1）本产品95℃初始变性30s足以使酶激活；复杂模板可延长至3min变性。
2）建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。