mTaq DNA Polymerase说明书
货号: M00840
规格：5×500U
保存：-20℃，1年
产品内容：
Component | RE1280 2500 U |
mTaq DNA Polymerase ，5 U/μl mTaq PCR Buffer, 10× | 5×100 μl 5×1.8 ml |
产品简介
mTaq DNA Polymerase是通过缺失Taq DNA Polymerase N端一段氨基酸和突变 改造得到的新型DNA聚合酶。通过改造后使本产品能够全血中存在的抑制剂产生耐受 作用，能够直接扩增人和小鼠全血样品中的DNA而无需事先对基因组进行提取和纯化。 PCR产物3’端为A，可直接用于T/A克隆。
质量控制
经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性； PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一 周，无明显活性改变。
使用方法
1. 使用前请将mTaq DNA Polymerase反复颠倒至完全混匀。
2. 将PCR薄壁管置于冰上，加入除全血外的以下试剂。
试剂 | 50 μl反应体系 | 终浓度 |
mTaq DNA Polymerase | 1 μl | |
mTaq PCR Buffer, 10× | 5 μl | 1× |
dNTP Mix，2.5 mM each | 4 μl | 200 μM each |
Forward Primer (10 µM) | 2 μl | 0.4 μM |
Reverse Primer (10 µM) | 2 μl | 0.4 μM |
全血* | ≤10% | |
RNase-Free water | x μl | |
Total | 50 μl |
注意：
1）*加入全血前反复上下吸打完全混匀各种试剂
2）DNA模板：可以使用肝素钠、 Na-EDTA、K-EDTA或柠檬酸钠处理全血。通常建议全血含量为5-10%。不推荐使用高浓度血液。对于高GC含量的模板，加入10%DMSO。
3）引物：寡核苷酸引物长度通常含20-30个核苷酸，并且最好GC含量在40-60%并均匀分布于引 物中。在常规的PCR反应中，引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。
3. 最后将全血加入管底。
4. PCR反应条件
步骤 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
变性 | 95℃ | 30s |
退火 | 50-68℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 250-500 bp/min |
终延伸 | 72℃ | 10 min |
30-40个循环
注意：
1）PCR仪于94-95℃预热，将样品放置于PCR仪上开始循环。
2）mTaq提高了冷敏感性，具备了一些热启动特性。通常可以通过在冰上配制反应成分、最后加入聚合酶以及将热循环仪预热至变性温度（95℃)后立即进行反应来避免非特异性产物的 产生。
3）变性温度与时间：在PCR循环前为了充分裂解血液细胞和释放/变性DNA，要求初始变性为 95℃ 5分钟。
4）退火温度与时间:退火时间通常为30秒-1分钟。退火温度可以低于理论退火温度（Tm）5℃开始，通过梯度PCR进行优化。
5）延伸时间：延伸反应通常在72℃下进行。一般每250-500 bp延伸时间为1分钟。推荐72℃ 10 分钟进行最终延伸。
6）通常35-40个循环可以达到最优扩增。
5. 结果检测：反应结束后取5 µl反应产物并加上电泳缓冲液一起电泳检测结果。