Multiplex Probe Mixture(for bisDNA)说明书
货号: M00850
规格：1mL
别名：甲基化检测专用预混液
保存： -20℃,尽量避免反复冻融
产品内容：
Component | 1 mL |
2×Multiplex Probe Mixture(for bisDNA) | 1 mL |
ddH2O | 1 mL |
产品简介
Multiplex Probe Mixture(for bisDNA)包含Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+和 Buffer缓冲体系的预混液，浓度为2x，DNA的甲基化大多使用亚硫酸氢盐来进行修饰， 该过程易造成DNA的降解或片段化，影响PCR反应的扩增效率。本产品中Buffer体系 的优化和dNTP、Mg2+浓度的调节，能有效提高转化后DNA扩增的稳定性和特异性。本 品中包含双抗修饰封闭的Taq酶，在常温条件下不具备酶活性，可有效抑制常温状态下 非特异扩增的产生，并且本品在PCR实验中具有耐盐、耐Mg2+和高保真等特性，大幅提高了实验操作的简便性。
注意事项
1. 使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2. 本产品置于-20℃避光保存，应避免反复冻融，否则可能导致产品性能下降。如果 在短期内需要频繁使用，可在2-8℃保存。
使用方法
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据具体用途、模板、引物 结构、目的片段大小和扩增效果不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
提取DNA扩增反应体系：
试剂 | 25 μL体系 | 50 μL体系 | 终浓度 |
2×Multiplex Probe Mixture(for bisDNA) | 12.5 μL | 25 μL | 1× |
Primer Mix ，10 μM each | 1 μL | 2 μL | 1× |
Template DNA | X μL | X μL | |
ddH2O | Up to 25 μL | Up to 50 μL |
注意：
1）通常引物浓度以0.2 μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。
2）使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3）通常DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含 有 的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
2. PCR反应程序
步骤 | 温度 | 时间 | 循环 | |
预变性 | 95℃ | 30 s | 1 | |
变性 退火/延伸 | 95℃ 60℃(依引物而定) | 10 s 30 s | } | 45 |
注意：
采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因导致信号较低或CT值较大的情况，可尝试三步法PCR扩增。