货号: M01960
规格: 50T/100T
保存条件: -20℃保存，避免反复冻融，复检期为1 年。
试剂盒组成：
试剂盒组成 | 50次 | 100次 |
AMV(10U/ul) | 25ul | 50ul |
5×AMV Buffer(含 DTT) | 250ul | 500ul |
Oligo(dT)16(10uM) | 250ul | 500ul |
RNasin(40U/ul) | 25ul | 50ul |
dNTPs(10mM) | 200ul | 400ul |
Taq Polymerase(5U/ul) | 25ul | 50ul |
10×PCR Buffer | 250ul | 500ul |
RNase-free ddH2O | 1ml | 2ml |
产品简介：
本试剂盒适用于各种RNA 制品的反转录反应以及随后的PCR 扩增。它采用AMV 进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在25ul 反转录体系和50ul PCR 反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR 产物用于后续的克隆实验。
本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT 酶采用进口的AMV，所以cDNA 更长，基因的信息保留得更完整! 反转录过程中特异的RNase 抑制剂可有效降低由于外源RNase 污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA 克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
操作步骤：
一、反转录反应
1、在冰浴的无菌无RNase 的离心管中加入如下反应成分：
0.5ug RNA 模板
5ul Oligo(dT)16 引物
补RNase-free ddH2O 至11.5ul
2、70℃保温5min 后迅速在冰上冷却5min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：
5ul 5×AMV Buffer
2.5ul dNTPs
0.5ul RNasin
0.5ul AMV
补RNase-free ddH2O 至25ul
3、42℃温浴60min，如果是用随机引物，请将离心管置37℃温浴60min。
4、反应后将离心管置冰上，反应产物可用于进行后续实验或-20℃保存。
二、PCR 反应
1、按以下各组分配制50ul PCR 反应体系：
10×PCR Buffer 5ul
dNTPs 1ul
上游引物（用户自备10um） 1ul
下游引物（用户自备10um） 1ul
RT 反应产物 2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul
2、混匀后短暂离心，PCR 仪扩增，琼脂糖凝胶电泳观察结果。
注意事项：
1、用于cDNA 合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除
菌处理。
2、RNA 样品要避免反复多次冻融，应使RNA 在冰浴中处于融化状态。
3、如果PCR 效果不理想，可以适当优化条件，比如改变退火温度或增加模板量。