通用RT-PCR试剂盒 (M-mLV )

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)

货号：M01970

规格：25T/50T/100T

保存：-20℃保存，避免反复冻融，复检期为1年。

产品组成：

产品简介：

本试剂盒适用于各种RNA制品的反转录反应以及随后的PCR 扩增。它采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物。同时，在20μL 反转录体系和50μL PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。

本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的M-MLV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。

操作步骤(仅供参考)：

1. 反转录反应

关于逆转录引物的选择：

1. 如果模板为真核生物来源，建议用Oligo（dT）₁₆，Oligo（dT）₁₆可以与真核生物mRNA的3’PolyA尾配对，可获得高产量的全长cDNA。
2. 模板为原核生物RNA的反转录请选用Random引物或者基因特异性引物。
3. Random引物适用于mRNA、tRNA和rRNA等所有RNA的反转录反应，对物种没有限制，病毒、细菌、植物、动物等都可使用。
4. 在冰浴的无RNase的离心管中加入如下反应成分：

1-5μg总RNA或50-500ng mRNA

2ul Oligo(dT)₁₆或2ul Random或2 pmole基因特异性引物

补RNase-free ddH₂O 至14.5μL

1. 70℃保温5min后迅速在冰上冷却2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：

1. 42℃温浴60min，如果是用Random引物，请先将离心管置25℃温浴10min，再42℃温浴60min。
2. 95℃加热5min终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。
3. 用RNase-free ddH₂O将反应体系稀释到50μL，取2-5μL进行PCR反应。
4. PCR反应
5. 按以下各组分配制50μL PCR 反应体系：

1. 混匀后短暂离心，PCR仪扩增，琼脂糖凝胶电泳观察结果。

注意事项：

1. 用于cDNA合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。
2. 试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期12个月。
3. RNA 样品要避免反复多次冻融，应使RNA在冰浴中处于融化状态。