通用反转录试剂盒(M-MLV)
货号：M01980
规格：50T/100T
保存：-20℃保存，避免反复冻融，复检期为1 年。
试剂盒组成 | 50次 | 100次 |
M-MLV(200U/μL) | 50μL | 50μL×2 |
5×M-MLV Buffer | 200μL | 400μL |
Oligo(dT)16(10uM) | 100μL | 200μL |
Random 引物(10uM) | 100μL | 200μL |
RNasin(40U/μL) | 25μL | 50μL |
dNTPs(10mM) | 50μL | 100μL |
RNase-free ddH2O | 1mL | 1mL×2 |
产品组成：
产品简介：
本试剂盒提供两种反转录通用引物适用于各种 RNA 制品的反转录反应。它采用 M-MLV 进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物用于后续的 PCR 扩增和分子克隆实验。
本试剂盒中配置的酶为进口的酶。RT 酶采用进口的 M-MLV，所以 cDNA 更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的 RNase 抑制剂可有效降低由于外源 RNase 污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于 cDNA 克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
操作步骤：
- 反转录反应
关于逆转录引物的选择 :
- 如果模板为真核生物来源，建议用 Oligo(dT)16 ， Oligo(dT)16可以与真核生物 mRNA 的 3’ Poly A 尾配对，可获得高产量的全长 cDNA。
- 模板为原核生物 RNA 的反转录请选用 Random引物或者基因特异性引物。Random 引物适用于 mRNA、tRNA 和 rRNA 等所有 RNA 的反转录反应，对物种没有限制，病毒、细菌、植物、动物等都可使用。
1、在冰浴的无RNase 的离心管中加入如下反应成分：
1-5μg 总RNA 或50-500ng mRNA
2μL Oligo(dT)16 或 2μL Random或2 pmole 基因特异性引物
补RNase-free ddH2O 至14.5μL
2、70℃保温5min 后迅速在冰上冷却2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：
4μL 5×M-MLV Buffer
1μL dNTPs
0.5μL RNasin
1μL M-MLV
3、42℃温浴60min，如果是用随机引物，请先将离心管置25℃温浴10min，再42℃温浴60min。
4、95℃加热5min 终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。
5、若用于后续PCR 扩增，用RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到50μL，取2-5μL作为PCR 反应模板。
注意事项：
1、用于cDNA 合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。
2、试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期12个月。
3、RNA 样品要避免反复多次冻融，应使RNA 在冰浴中处于融化状态。