产品详情
血液直接PCR试剂盒(去红细胞)说明书
货号: M01990
规格:50T/100T
保存:-20℃保存,有效期1年。
试剂盒内容:
产品名称 | 50T | 100T | 保存条件 |
试剂A | 25mL | 50mL | -20℃ |
试剂B | 3mL | 6mL | -20℃ |
试剂C | 200μL | 400μL | -20℃ |
dNTPs | 100μL | 200μL | -20℃ |
10×PCR Buffer | 500μL | 1mL | -20℃ |
DNA聚合酶 | 60μL | 120μL | -20℃ |
产品简介:
去红细胞法直接PCR试剂盒,经试剂A和试剂B处理后的裂解产物就可直接作为PCR模板,无需对血液进行基因组DNA的提取。
产品特色:
- 所需样本量极少。
- 无需高质量的模板就能进行PCR反应,节约时间和成本,适用性广等优点。
操作步骤:
- 取50μL全血于1.5mL离心管中,加入150μL试剂A,轻轻涡旋或颠倒混匀,于室温静置10min。
- 13000rpm,离心1min,移液器小心吸取,弃上清。
- 向沉淀中加入150μL试剂A,轻轻吹起沉淀,13000rpm,离心1min,移液器小心吸取,弃上清。
- 重复步骤3。
- 向沉淀中加入49uL试剂B和1μL试剂C,用移液器吸头反复吸打混匀。
- 上述液体55℃加热15min,95℃加热5min。12000rpm,离心1min,上清即为PCR反应体系的DNA模板。
PCR反应体系:
PCR反应成分 | 25μL体系 |
模板 | 2μL |
10×PCR Buffer | 2.5μL |
dNTPs | 0.5μL |
正向引物(10μM) | 1μL |
反向引物(10μM) | 1μL |
DNA聚合酶 | 1μL |
灭菌水 | 补足至25μL |
PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5min | 1 |
变性 | 94℃ | 15s | 30 |
退火 | 56℃ | 30s | |
延伸 | 72℃ | 1min/kb | |
终延伸 | 72℃ | 3min | 1 |
保温 | 4℃ | - | - |
实验结果展示:
本试剂盒用大鼠/小鼠血液直接PCR后的电泳图(三对引物)
M:Marker
注意事项:
- 取新鲜血液放置过夜,效果会比新鲜的好。
- 每次制备的模板最好现用现做。
- 配制好的试剂C放-20℃保存。
- 若样品蛋白含量较高,可适当提高试剂C使用量,建议不要超过4ul/样品。
- 红细胞去除过程中,尽量将红细胞裂解彻底,如果模板最后呈红色,可能会影响PCR效果。
- 若样品为已经去除红细胞(全部为白细胞)血液样品,可直接进行步骤5及后续实验操作。