血液直接扩增试剂盒说明书
货号：M02000
规格：50μL*40 T/50μL*200 T
保存：长期保存应置于-20℃； 4℃可保存3 个月。解冻后使用前应混匀，避免产生大量气泡；避免反复冻融。
产品内容：
名称 | 50μL*40 T | 50μL*200 T |
Mix | 1 mL | 5×1 mL |
ddH20 | 1 mL | 5×1 mL |
产品说明：
血液直接扩增PCR Mix 具有很强的血源性抑制物耐受性，是适用于各种来源（EDTA、肝素、柠檬酸钠抗凝） 的血液样品免核酸提取、直接进行DNA 扩增检测的专用试剂。本品经过特殊优化，包含特殊修饰的热启动酶和血源性抑制物耐受剂，在50μL 的反应体系中，加入0.2μL 的血液即有很强的扩增活性。本品具有优良的特异性和血源性抑制物抗性，直接扩增具有良好的效果。
血液直接扩增PCR Mix 含有抗抑制酶、PCR Buffer、MgCl2、dNTPs、稳定剂等成分。
反应条件：
1、PCR 体系：
试剂 | 25μL 体系 | 50μL 体系 | 终浓度 |
2×血液直接扩增PCR Mix | 12.5μL | 25μL | 1× |
Primer 1 | 0.5~2.5μL | 1~5μL | 0.2~1.0μM |
Primer 2 | 0.5~2.5μL | 1~5μL | 0.2~1.0μM |
血液 | X μL | 2X μL | 1%~10% |
ddH2O | 8uL | 16 μL | - |
Total volume | 25μL | 50 μL |
注意：加入血液前，要上下颠倒血液，使由于长时间放置而沉淀的血细胞充分悬浮。
2、PCR 程序：
预变性： 95℃ 5min
变性： 95℃ 30sec
退火： 55-65℃ 30sec 35 个循环
延伸： 72℃ 60sec/kb
72℃ 10min
4℃ Hold
常见问题及解答：
1. 扩增产物少或没有扩增。
(1) 在正式实验之前，应该检查引物的扩增性能、特异性和最适反应条件。
(2) 使用高质量的引物，确认引物浓度是否准确。
(3) 增加PCR 循环数。
(4) 降低退火温度，必要时进行退火温度梯度尝试。延长退火时间至90sec-3 min 可增加扩增产
物量。
(6) 10%-45%终浓度范围内调整全血模板使用量。
(7) 若产物过长，需重新设计引物，一般不应超过1.2kb。
(8) 延长循环内延伸时间。
(9) 在全部加样完成后，应充分混匀，再进行PCR。
2. 存在非特异性扩增。
(1) 提高退火温度。
(2) 减少循环数。
(3) 减少引物使用量。
(4) 重新设计引物。