产品详情
组织直接PCR试剂盒说明书
货号: M02010
规格:50T/100T
保存:-20℃保存,有效期1年。
试剂盒内容:
产品名称 | 50T | 100T | 保存条件 |
试剂A | 4mL | 8mL | -20℃ |
试剂B | 100μL | 200μL | -20℃ |
dNTPs | 100μL | 200μL | -20℃ |
10×PCR Buffer | 500μL | 1000μL | -20℃ |
DNA聚合酶 | 60μL | 120μL | -20℃ |
研磨棒 | 25个 | 50个 | 室温 |
产品简介:
动物组织直接PCR试剂盒可对不同动物组织进行PCR扩增。本裂解液既能使组织裂解充分,同时其成份又不影响PCR扩增,使裂解产物可直接作为PCR反应模板。一些样本比较容易裂解如脾和肾等,这些组织存在较少的PCR抑制剂,裂解后核酸完全释放。而对于一些不易裂解的组织如,心脏、肝脏、肺、尾巴等,本裂解液也能起到很好的裂解效果。动物组织中存在大量抑制PCR反应的物质,本试剂盒中DNA聚合酶具有很强的扩增性能,对于含有少量PCR抑制剂的粗提样本也能实现很好的扩增效果。
操作步骤:
- 取样:称取样品(新鲜样品,-20℃冷冻样品均可)于1.5mL EP管中。
取样标准:鼠组织、内脏(心、肝、脾、肺、肾)、耳朵称取5mg,鼠尾2-3mm。
- 研磨样品:在盛有组织的1.5mL EP管中加入59μL试剂A和1μL试剂B,混匀后用研磨杵充分捣碎动物组织。
- 裂解样品:55℃ 20min,95℃ 5min。
- 12000rpm,离心1min,上清即为PCR反应体系的DNA模板。
PCR反应体系:
PCR反应成分 | 25μL体系 |
DNA模板 | 2μL |
Primer 1(10μM) | 0.5μL |
Primer 2(10μM) | 0.5μL |
DNA聚合酶 | 1μL |
dNTPs | 0.5μL |
10×PCR Buffer | 2.5μL |
灭菌水 | 补足至25μL |
PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5min | 1 |
变性 | 94℃ | 15s | 30 |
退火 | 56℃ | 30s | |
延伸 | 72℃ | 1min/kb | |
终延伸 | 72℃ | 3min | 1 |
保温 | 4℃ | - | - |
实验结果展示:
本试剂盒用小鼠组织直接PCR后的电泳图(一对引物)
M:Marker
产品特色:
- 所需样本量极少。
- 无需高质量的模板就能进行PCR反应,节约时间和成本,适用性广等优点。
注意事项:
- 称取组织不要过量,过量导致裂解不完全,影响扩增效果。
- 研磨杵要尽可能的捣碎组织,否则会影响裂解效果。
- 每次制备的模板最好现用现做。
- 配制好的试剂C放-20℃保存。
- 若样品蛋白含量较高,可适当提高试剂C使用量,建议不要超过4uL/样品。
- 本产品同样适用于细胞样品PCR直接扩增,收取微量细胞即可。