PAGE凝胶银染试剂盒

PAGE凝胶快速银染试剂盒

货号：M02090

规格：1L

保存：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期12个月。

试剂盒内容：

注：1L 规格指可配制的银染色液的体积，实际使用次数根据PAGE 胶大小不同而不同。

产品简介:

蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如巯基、碳基等）与银的结合，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag⁺还原成银颗粒，可把蛋白电泳带染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。其灵敏度比考马斯亮蓝高，该产品整个过程操作简单，灵敏度高，能检测到10ng以下的蛋白条带。

操作步骤:

一、染色液配制(无水乙醇自备)

需要配制的染色液体积根据PAGE胶的大小而定，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗，染色液须用去离子水配制，现用现配。如果配制的溶液体积不是100mL，可以按比例改变各成分用量。

1. 固定液：取40ml无水乙醇，10ml染色液A加去离子水至100ml，混匀；
2. 敏化液：取30ml无水乙醇，10ml染色液C加去离子水至100ml，混匀；
3. 银染液：称取0.12g试剂E，用50ml去离子水溶解，加入10ul染色液B混匀，加去离子水至100ml现用现配。
4. 显色液：10ml显色液D和30ul染色液B加入去离子水至100ml，混匀，现用现配。

5. 终止液：取5ml 染色液A加去离子水稀释至100ml，现用现配。

二、染色

1. PAGE电泳结束后，将PAGE蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中，用固定液固定30min。

2. 将PAGE胶转移至敏化液中，使染液没过PAGE胶，室温作用30min。可置于摇床上缓慢摇晃。

3. 弃去敏化液，用去离子水漂洗三次，每次10min。

4. 将PAGE胶转移至银染液中，使染液没过PAGE胶，室温摇晃40min。

5. 将PAGE胶转移至显色液中，使显色液没过PAGE胶，室温摇晃，该显色一般在10min左右。

6. 再选择合适的时间进行终止，弃去显色液，加入终止液即可。最后可进行信号收集保存。

注意事项：

1. 银染主要出现在PAGE胶的表面，使用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
2. 对于考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。考染过程中的乙酸会干扰银染，因此要确保将PAGE凝胶中残留的乙酸彻底洗净。
3. 不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。因此，不宜用银染测定 不同蛋白的比例。
4. 染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择 40-60 rpm.
5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程中都应带手套操作。
6. PAGE凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1μS的去离子水。
7. 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗过程中 洗得不够彻底，或是染色过程时温度太低。
8. 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
9. PAGE胶中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些物质会干扰银染。
10. 室温操作时，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。
11. 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。
12. 染色使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。
13. 银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。
14. 银染容器最理想的是玻璃平皿，其次是搪瓷盘和密胺塑料盘等。

15. 试剂如有沉淀析出，混匀溶解（可加热）后室温使用。