磁珠法血液DNA提取试剂盒说明书
货号：M02920
规格：96T
英文名称：Magbead Blood DNA Kit
保存：RT，1年
产品内容：
Component | 96 preps | 4×96 preps |
Buffer ML | 24 mL | 96 mL |
Buffer GW1(concentrate) | 80 mL | 4×80 mL |
Buffer GW2(concentrate) | 50 mL | 4×50 mL |
Buffer EB | 30 mL | 96 mL |
Proteinase K | 2×1.25 mL | 2×5 mL |
Magbeads PN | 2×1 mL | 8 mL |
产品说明（仅供参考）:
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的血液DNA提取方法，适用于从新鲜或冷 冻抗凝血（柠檬酸盐、 EDTA、肝素处理过的血液样品）中提取血液DNA。在高盐存在 时， DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。漂洗后，高纯度的DNA被洗脱于Buffer EB或去离子水中。 DNA得率与样品的类型，储存条件、时间以及样品中白细胞的含量 有很大关系，从200 μL 冷冻保存的抗凝血中通常可以提取得到3-10 μg基因组DNA。纯 化得到的DNA纯度好（A260/280 的比值在1.7-1.9之间， A260/230 的比值大于1.5），完整度 高（最高可达50 kb），可用于二代测序、克隆、定量PCR、芯片检测等下游实验。
该试剂盒可与液体工作站和磁棒法磁珠自动提取系统配套使用，简单、快速地进 行大规模提取，大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。
自备仪器、试剂
1 ．手动单管提取：
1）恒温混匀仪
2）2/15 mL磁力架
3）异丙醇、无水乙醇
2 ．手动96孔深孔板提取：
1）恒温混匀仪
2）废液抽吸系统
3）手动连续分液器
4）电动连续分液器——推荐品牌Eppendorf
5）手动连续分液器分液管（25 mL）——推荐品牌Eppendorf
6）96孔板磁力架
7）异丙醇、无水乙醇
3 ．磁棒法磁珠自动提取系统：
1）磁棒法磁珠自动提取系统——建议品牌Thermo Fisher
2）异丙醇、无水乙醇
实验前准备及重要注意事项
1 ．异丙醇与Magbeads混合物的制备（以制备提取10个样品所需量为例）
1）向合适容量（加入异丙醇和Magbeads后总体积小于离心管容积的2/3）的离心 管中加入3.3 mL【0.3×（10+1）=3.3】的异丙醇。
注意：如用移液器加入异丙醇，需用移液器将枪头在异丙醇吹吸两次后再缓慢吸取异丙醇。
2）向上一步的离心管中加入220 μL【20×(10+1)=220】Magbeads
注意：Magbeads加入前需涡旋振荡20秒使其充分混匀，异丙醇与Magbeads混合物使用前需涡旋振荡20秒钟使其成为均一的溶液。
3）异丙醇与Magbeads混合物使用前需涡旋振荡10秒钟使其成为均一的溶液。
2 ．Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。 3 ．样品应避免反复冻融，否则会导致提取得到的DNA片段较小且提取得率低。
4 ．次使用前应按试剂瓶标签在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。 5 ．如Buffer ML中出现沉淀，请在56℃水浴锅中重新溶解，摇匀后即可使用。
6 ．实验过程中，磁珠在溶液中的充分混匀对于提取的得率与纯度都有很大的影响。实 验过程中务必使磁珠与溶液充分混匀。不同厂家生产的恒温混匀仪震荡混匀效果有 一定差异，实验过程中请注意观察磁珠状态。如出现磁珠贴壁等未充分混匀的现象，请用移液器吹吸混匀或调整震荡频率。
操作步骤（手动单管操作）
1 ．向1.5 mL的离心管中加入20 μL Proteinase K，之后加入200 μL的血液。
注意：1）冷冻抗凝血液需提前在室温（15-30℃）下放置，融化混匀。
2）如血液体积大于或小于200 μL，ProteinaseK、BufferML和异丙醇与磁珠混合物的用量需按比例调整。
2 ．向离心管中加入200 μL Buffer ML，涡旋振荡5秒钟使其充分混匀后，将离心管放于 56℃水浴锅中孵育15分钟，期间涡旋震荡混匀2次。
3 ．将离心管从水浴锅中取出，短暂离心后室温放置5分钟。加入彻底混匀的320 μL异丙醇 与Magbeads混合物，涡旋震荡混匀5秒钟后将离心管放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀 仪上震荡混匀5分钟或将离心管连续颠倒混匀10分钟。
4 ．将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去 溶液（保持离心管固定于磁力架上）。
5 ．将离心管从磁力架上取下，加入750 μL Buffer GW1（使用前请检查是否已加入无水 乙醇）后涡旋点震1分钟或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震 荡混匀2分钟（震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态）。之后将离心管放于磁力 架上静置1分钟， 待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖 上的杂质洗落后彻底弃去溶液（保持离心管固定于磁力架上）。
6 ．重复步骤5。
7 ．将离心管从磁力架上取下，加入750 μL Buffer GW2（使用前请检查是否已加入无水 乙醇）后涡旋点震1分钟或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震 荡混匀2分钟（震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态）。之后将离心管放于磁力 架上静置1分钟， 待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖 上的杂质洗落后彻底弃去溶液（保持离心管固定于磁力架上）。
8 ．重复步骤7。
9 ．保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液，之 后室温放置5-10分钟，使乙醇挥发干净。
注意：如果离心管侧壁上有液珠，可向离心管中加入750 μl无水乙醇。盖盖后颠倒离心管（保持离心管固定于磁力架上），之后彻底弃去无水乙醇。
10 ．将离心管从磁力架上取下，加入50-200 μL Buffer EB。涡旋震荡使磁珠完全悬浮于 洗脱液中后将其放于56℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟，或将离心 管放于56℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
11 ．将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液器 将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。
操作步骤（手动96孔深孔板操作）
1 ．向2 mL 96孔深孔板（简称“深孔板” ）中加入20 μL Proteinase K，之后加入200 μL血 液，并记录每孔中所加血液名称。
注意：1）可将ProteinaseK预先分装于8连管中，每管加入260 μL。之后，用8通道移液器将Proteinase K分装于96孔深孔板中。
2）血液需加到96孔深孔板的底部，避免血液触碰到孔的上部。
2 ．向深孔板中用电动连续分液器或8通道移液器加入200 μL Buffer ML。
3 ．将深孔板固定于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟，盖上硅胶盖后将 深孔板放于56℃水浴锅中孵育15分钟，之后再将深孔板固定于25℃、 1600 rpm的 恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
4 ．将深孔板从恒温混匀仪上取下，用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入 彻底混匀的320 μL Magbeads与异丙醇混合物。盖上硅胶盖后，立即将深孔板固定 于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
5 ．将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统 或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
注意：用废液抽吸系统去除溶液时需将真空泵调节至较小的负压力值，使溶液以一个合适的速度被吸走,速度过快会造成磁珠的丢失。
6 ．用手动连续分液器向深孔板中加入500 μL Buffer GW1（加入前检查是否已加入无水 乙醇），之后将深孔板固定于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
7 ．将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统 或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
8 ．重复步骤6-7。
9 ．用手动连续分液器向深孔板中加入500 μL Buffer GW2（加入前检查是否已加入无水 乙醇），之后将深孔板固定于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
10 ．将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统 或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
11 ．重复步骤9-10。
12 ．用手动连续分液器向96孔深孔板中加入500 μL无水乙醇，之后将深孔板固定于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀1分钟。
13 ．将板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8 通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
14 ．保持深孔板固定于96孔板磁力架上，将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置2分钟。 之后将深孔板从96孔板磁力架上取下放于100℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上静置5 分钟。
15 ．用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板加入100-200 μL Buffer EB，之后将深 孔板放于100℃（因该恒温混匀仪为悬空加热，洗脱液实际温度在50-60℃之间）、 1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀10分钟。
16 ．将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟，用8通道移液器 溶液转移至96孔PCR板中盖盖后-20℃保存备用。
操作步骤（康为CW2361与KingFisher Duo的匹配）
CW2361与KingFisher Duo匹配后可从12份体积为200 μL的不同血液中提取基因组 DNA。
1 ．按下表将样品与试剂加入相应位置：
名称 | 位置 | 试剂及用量 |
DW 96深孔板 | A1-A12 | Proteinase K: 20 μL Blood: 200 μL Buffer ML: 200 μL |
B1-B12 | KF Duo 12道磁套 | |
C1-C12 | Buffer GW1: 700 μL | |
D1-D12 | Buffer GW1: 700 μL | |
E1-E12 | Buffer GW2: 700 μL | |
F1-F12 | Buffer GW2: 700 μL | |
KF Duo洗脱条 | A1-A12 | Buffer EB: 100 μL |
2 ．启动软件BindIt，导入CoWin Magbind Blood DNA Duo-200程序。将加入样本与试剂 的DW 96深孔板与KF Duo洗脱条放入KingFisher Duo仪器中后执行程序CoWin Magbind Blood DNA Duo-200。
3 ．约12分钟后仪器暂停，取出DW 96深孔板，向A1-A12孔中加入320 μL彻底混匀的 Magbeads与异丙醇混合物。
4 ．将DW 96深孔板重新放入仪器中，继续运行程序。约26分钟后程序运行结束。
5 ．取出DW 96深孔板与KF Duo洗脱条，将洗脱条中的DNA溶液转移至1.5 mL离心管中， -20℃保存。
康为CW2361与KingFisher Flex匹配后可从96份体积为200 μL的不同血液中提取血液基因组DNA。
1 ．按下表将样品与试剂加入相应板中：
名称 | 类型 | 试剂及用量 |
Sample plate | DW 96深孔板 | Proteinase K: 20 μL Blood: 200 μL Buffer ML: 200 μL |
Wash plate I | DW 96深孔板 | Buffer GW1: 700 μL KF 96 DW磁套 |
Wash plate II Wash plate III | DW 96深孔板 DW 96深孔板 | Buffer GW1: 700 μL Buffer GW2: 700 μL |
Wash plate IV | DW 96深孔板 | Buffer GW2: 700 μL |
Elution plate | DW 96深孔板 | Buffer EB: 100 μL |
2 ．启动软件BindIt，导入CoWin Magbind Blood DNA Flex-200程序。将加入试剂的DW 96 深孔板按顺序放入仪器中的相应位置后执行CoWin Magbind Blood DNA Flex-200程序。
3 ．约14分钟后仪器暂停，取出样品板，向样品板中加入320 μL彻底混匀的Magbeads与异 丙醇混合物。
4 ．将样品板重新放入仪器中，继续执行程序。约26分钟后程序执行完成。
5 ．取出洗脱板，用膜封闭后-20℃保存。