磁珠法新鲜组织DNA提取试剂盒说明书
货号: M02940
规格：96T
英文名称：Magbead Tissue DNA Kit
保存：RT，1年
产品组成：
Component | 96 preps | |
Buffer GTL | 30 mL | |
Buffer GL | 30 mL | |
Buffer GW1（concentrate） | 80 mL | |
Buffer GW2（concentrate） | 50 mL | |
Buffer EB | 30 mL | |
Proteinase K | 2×25 mg | |
Proteinase K Storage Buffer | 2×1.25 mL | |
RNase A（100 mg/mL） | 0.3 mL | |
Magbeads PN | 1 mL | 严禁冰冻和高速离心 |
产品说明（仅供参考）:
该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的从新鲜组织中提取DNA的方法。组织裂解后，DNA结合于硅基包被磁珠表面。漂洗后，高纯度的DNA洗脱于EB或去离子水中。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、 Real-time PCR、 SNP基因分型、 STR基因分型、二代测序和药物基因组学研究等。
自备仪器、试剂
康为CWE2100全自动核酸提取仪、无水乙醇、异丙醇、96 DW Plate、 8 channel Comb
实验前准备及重要注意事项
1、向25 mg Proteinase K粉末中加入1.25 mL Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，以免影响其活性。
2、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer GTL和 Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GTL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
4、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入2 μL DNase-Free的RNase A（100 mg/mL），试剂盒中的RNase A如果长时间不用，建议-20 ℃保存。
5、实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56℃。
6、Magbeads PN严禁冰冻和高速离心，否则可能会对Magbeads PN造成不可逆的损害。Magbeads PN每次使用时请充分振荡混合均匀。
操作步骤（手动）
1、称取20-30 mg组织，将组织在液氮中磨碎或使用组织匀浆机打碎，将打碎的组织转移到1.5 mL离心管中。
2、向上述管中加入180 μL Buffer GTL和20 μL Proteinase K之后将离心管固定于56℃、 1200 rpm恒温混匀仪上震荡裂解1小时或56℃水浴过夜至固体组织充分裂解，即为Lysate。
3．可选步骤，如果少量RNA的存在会对下游实验造成影响，建议向Lysate中加入2 μL浓度为100 mg/mL的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置2 min。
4．向Lysate中加入200 μL Buffer GL，涡旋振荡混匀。
5．向离心管中加入200 μL异丙醇与10 μL Magbeads PN后涡旋震荡混匀5秒钟，之后将离心管固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡结合10分钟。
6．将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
7．向离心管中加入750 μL Buffer GW1（使用前请检查是否已加入无水乙醇），涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。
8．将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
9．重复步骤7-8。
10．向离心管中加入750 μL Buffer GW2（使用前请检查是否已加入无水乙醇），涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。
11．将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
12．重复步骤10-11。
13．离心管短暂离心后，将其重新固定于磁力架上用移液器去除管底溶液，之后开盖室温放置5-10分钟使乙醇充分挥发。
14．向离心管中加入50-200 μL Buffer EB后涡旋震荡使磁珠充分悬浮于洗脱液中，之后将离心管固定于56℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟。
15．将离心管固定于磁力架上静置2分钟，之后将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。
操作步骤（仪器与CWE2100匹配）
1．称取20-30 mg组织，将组织在液氮中磨碎或使用组织匀浆机打碎，将打碎的组织转移到1.5 mL离心管中。
2．向上述管中加入180 μL Buffer GTL和20 μL Proteinase K之后将离心管固定于56℃、 1200 rpm恒温混匀仪上震荡裂解1小时或56℃水浴过夜至固体组织充分裂解，即为Lysate。
3．可选步骤，如果少量RNA的存在会对下游实验造成影响，建议向Lysate中加入2μL浓度为100 mg/mL的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置2 min。
- 向Lysate中加入200 μL Buffer GL，涡旋振荡20 s，此刻离心管中液体即为Mixture。
按下表向96 DW深孔板中加入试剂：
位置 | 试剂及用量 |
1&7 Colume | Mixture : all Magbeads PN: 10 μL 异丙醇: 200 μL |
2&8 Colume | Buffer GW1: 750 μL |
3&9 Colume | Buffer GW1: 750 μL |
4&10 Colume | Buffer GW2: 750 μL |
5&11 Colume | Buffer GW2: 750 μL |
6&12 Colume | Buffer EB: 100 μL |
在1&7列中，可先将异丙醇与Magbeads PN按比例混匀后再加入。将磁套与96 DW深孔板放入CWE2100中，运行“FFPE/Tissue DNA程序”。约32分钟后程序运行结束，将96DW深孔板和磁套从仪器中取出，把“6&12 Colume”中的洗脱产物转移至离心管中-20℃保存备用。